Klíčová slova

Papanicolaou šmouhy, Trichomonas vaginalis, mikroskopie

Úvod

Trichomonas vaginalis je bičovali prvok, který způsobuje Trichomonaisis a je nejběžnější léčitelné pohlavně přenosné choroby po celém světě . Kromě lidípapillomaviru je trichomoniáza nejčastější pohlavně přenosnou infekcí v Jednotkáchstáty dnes. Mezi ženami i muži, sdružení T., vaginalis s humanimmunodeficience akvizice a přenos byl prokázán v několika studiích . U žen může trichomoniáza hrát roli ve vývoji cervikální neoplazie, pooperačních infekcí a nepříznivých výsledků těhotenství a jako faktor atypického zánětu pánvenemoci a neplodnost. U mužů se trichomoniáza objevila jako příčina nongonoccocalurethritis a jako přispívající k neplodnosti mužského faktoru . Nejběžnější metodadiagnostika je přes noc kultura s rozsahem citlivosti 75-95% ., Byly také použity metody, jako jerapid antigen testování a transkripce zprostředkované amplifikace, a jsou řečenymají větší citlivost, ale nejsou široce používány . Přítomnost T. vaginalis můžetaké být diagnostikován PCR, pomocí primerů specifických pro GENBANK / L23861 . Pap stěr je rutinní screeningový test používaný k detekci cervikálních abnormalit a prekancerousdysplastických změn děložního čípku. Detekuje také určité virové, bakteriální a fungálníinfekce děložního čípku a vagíny ., Existují také epidemiologické a experimentální důkazyže Pap šmouhy jsou prospěšné při detekci infekcí, které jsou rizikovými faktory spojenými s cervikálnímrakovina, jako je lidský papilomavirus . Cílem této studie bylo určit vhodnostpapového nátěru při detekci Trichomonas vaginalis v cervikálních a vaginálních vzorcích.,

Materiály a Metody,

Tři sta cervikální a vaginální vzorky v vaty-šikmý aplikátory, které byly sentfor mikroskopie byly současně zkoumány konvenční Papanicolaou metoda,kultury a pomocí PCR na přítomnost Trichomonas vaginalis v některých nemocnicích v Jižní andWestern Nigérie.

Papanicolaou způsob,

Každý vzorek byl rozmazaný na čistý tuk zdarma slide a pevné v éteru-alkohol za 30 minut., Vzorky byly poté obarveny podle Papanicolaou metoda takto: Harris’shaematoxylin bez kyselině octové po dobu 5 minut, opláchnout ve vodě z kohoutku a diferencované v 1% acidalcoholfor 30 sekund a černěná Scott vody po dobu 2 minut. Šmouhy byly odebrány na 95% alkoholu a obarveny v OG6 po dobu 2 minut, opláchnuty v 95% alkoholu a barveny v EA 35 po dobu 2 minut. Stěry byly poté odebrány na dvě změny absolutního alkoholu, xylenu a namontovány inDPX., Barevné šmouhy byly zkoumány pod světelným mikroskopem při nízkých a vysokých powerobjectives na přítomnost Trichomonas vaginalis a perinukleární halo.

vyšetření mokrého přípravku

každý aplikátor s hrotem vaty byl následně opláchnut ve zkumavce obsahující asi 2 ml normálního fyziologického roztoku. Obsah byl nalit na čistý skleněný sklíčko a zkoumal pod světlemmikroskop na přítomnost rychle se pohybujících organismů.

Kultura T. vaginalis

Příprava kultivačního média a kultury

Kupferberg Trichomonas médium bylo připraveno rozpuštěním 23.,5 g základny KupferbergTrichomonas (QUELAB, Kanada) v 950 ml destilované vody za pomoci tepla,sterilizované v autoklávu po dobu 15 minut při tlaku 15 Ib (121°C) a ochlazené. Bylo přidáno 50 ml heatinaktivovaného (55-60°C) hovězího séra. Antibiotika (penicilin G a streptomycin) aantifungal (amfotericin B) byly přidány do směsi a skladovány při 4ºC. Asi 15 ml themedia bylo vloženo do kultivační trubice a zahříváno na 37°C po dobu 15 minut. Cervikální a vaginální swabswere umístěny do média a inkubovány při 37 ° C po dobu 7 dnů, po které byly zkoumány mikroskopicky., Médium bylo dvakrát promyto ve sterilním fosfátově pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS)pH7.2 a podrobeno extrakci DNA.

extrakce DNA, primerů a PCR

kultury byly promyty dvakrát ve sterilní fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku pH7.2 a zavěšené in400µl T/E vyrovnávací paměti. Extrakce DNA byla provedena za použití SDS a proteinázy K následované byCTAB/NaCl. Přítomnost DNA byla potvrzena elektroforézou před Pcramplifikací. Primery založené na T., vaginalis DNA byla použita k amplifikaci 300 bp kus ofgenome (TIB MOLBIOL, Srn), zatímco PCR reakce byla provedena pomocí automatedthermal centrifugy (Eppendorf master cycler gradient).

Výsledky

Tabulka 1 Pap smear, mokrá příprava a PCR

300 vzorky zkoumány pomocí Pap techniku, 24 (8%) měl perinukleární halo suggestiveof T. vaginalis zatímco organismů byly pozorovány u 15 (5%) z nich. 30 (10%) vzorkůměl jak T. vaginalis, tak perinukleární halo., Ve vlhkých přípravcích pod světelným mikroskopem mělo 36(12%) vzorků T. vaginalis.

Tabulka 2 Procento citlivost ve srovnání s kultivací a PCR

Když ve srovnání s pozitivními výsledky a kultury, PCR, mokré preparáty měl highestsensitivity z 81.58%, následuje 65.77% diagnóza na základě perinukleární halo a T. vaginalis. Předpokládanou diagnózu na základě perinukleární halo sám byl 52.63%, zatímco diagnosisbased na identifikaci organismů v Pap stěru byl 42.,11%.

Diskuse

Papanicolaou je nejlepší způsob barvení v cytologii, protože pomáhá účinně differentiatemalignant buněk z non-maligních buněk. Také skvrny cytoplazmy a její obsah . Jeho schopnost odlišit acidofilní materiály od bazofilních materiálů, stejně jako schopnost udržet ne-buněčné látky, jako je fibrin, krystaly a pigmenty, z něj činí základní skvrnu v cytologii . T. vaginalis, příčinný organismus pro trichomoniázu je nejčastějšíodolný sexuálně přenosný organismus na celém světě ., Parazitizuje jak muže, tak ženykde je někdy asymptomatická v počátečních stádiích infekce. Infekce T. vaginalis jepoloženo hrát roli ve vývoji cervikální neoplazie, pooperačních infekcí a nepříznivýchvýsledky těhotenství a jako faktor atypického zánětlivého onemocnění pánve a neplodnosti .K dispozici je také epidemiologické a experimentální důkazy, že Pap stěry jsou prospěšné indetecting infekcí, které jsou rizikové faktory spojené s rakovinou děložního čípku, jako humanpapilloma virus . Existuje několik metod diagnostiky trichomoniázy., Existuje nejsnadnějšímetoda, která zahrnuje vyšetření mokrého přípravku pod mikroskopem, kde jeorganismy jsou vidět rychle se pohybující ve všech směrech. Mezi další metody patří noční kultura, rychlé testování antigenu a amplifikace zprostředkovaná transkripcí a PCR .Pap smear je rutinní screeningový test používaný k detekci cervikálních abnormalit aprekancerózní dysplastické změny děložního čípku. Detekuje také určité virové,bakteriální a houbové infekce děložního čípku a vagíny ., V tomto experimentu byly vyšetřeny mokré přípravkycervikální a vaginální nátěry a Papanikolaou barvené nátěry a porovnány svýsledky získané z PCR po 7 dnech kultury. Přítomnost perinukleárního halo v epitelubuňky byly použity jako předpokládaná diagnóza pro T. vaginalis. Pap šmouhy nejsou lepší než wetpreparace při detekci T. vaginalis, jak je znázorněno v tabulkách 1 a 2. Kultura je velmicitlivá metoda detekce T. vaginalis, ale je to drahé a časově náročné. Uzavírá se, že zatímco T., vaginalis by měl být hlášen v cervikálních a vaginálních papových nátěrech, jeho nepřítomnost v těchtosměny nejsou indikací pro absolutní nepřítomnost organismu u pacienta.