Schlüsselwörter

Papanicolaou-Abstriche, Trichomonas vaginalis, Mikroskopie

Einleitung

Trichomonas vaginalis ist ein flagellierter Protozoe, der Trichomonaisis verursacht und weltweit die häufigste heilbare sexuell übertragbare Krankheit ist . Neben dem humanen Papillomavirus ist Trichomoniasis heute die häufigste sexuell übertragbare Infektion in den Vereinigten Staaten. Sowohl bei Frauen als auch bei Männern, die Vereinigung von T., vaginalis mit Humanimmunodeficiency Erwerb und Übertragung wurde in mehreren Studien gezeigt . Bei Frauen kann Trichomoniasis eine Rolle bei der Entwicklung von zervikalen Neoplasien, postoperativen Infektionen und nachteiligen Schwangerschaftsergebnissen sowie als Faktor für atypische Beckenentzündungen spielenkrankheit und Unfruchtbarkeit. Bei Männern hat sich Trichomoniasis als Ursache für Nongonokokalurethritis und als Beitrag zur männlichen Faktor-Unfruchtbarkeit herausgestellt . Die häufigste Methode derdiagnose ist über Nacht Kultur mit einem Empfindlichkeitsbereich von 75-95% ., Es wurden auch Methoden, wie zum Beispiel der Rapid-Antigen-Test und die transkriptionsvermittelte Amplifikation, eingesetzt, die zwar eine größere Sensitivität aufweisen, aber nicht weit verbreitet sind . Das Vorhandensein von T. vaginalis kannauch durch PCR diagnostiziert werden, wobei für GENBANK/L23861 spezifische Primer verwendet werden . Der Pap-Abstrich istein routinemäßiger Screening-Test zum Nachweis von zervikalen Anomalien und präkanzerösen dysplastischen Veränderungen des Gebärmutterhalses . Es erkennt auch bestimmte virale, bakterielle und Pilzinfektionen des Gebärmutterhalses und der Vagina ., Es gibt auch epidemiologische und experimentelle Beweisdass Pap-Abstriche bei der Erkennung von Infektionen von Vorteil sind, die Risikofaktoren für Zervikalkarzinome wie das humane Papillomavirus sind . Ziel dieser Studie war es, die Eignung von Pap-Abstrich beim Nachweis von Trichomonas vaginalis in zervikalen und vaginalen Proben zu bestimmen.,

Materialien und Methoden

Dreihundert zervikale und vaginale Proben in Watte-Applikatoren, die zur Mikroskopie geschickt wurden, wurden gleichzeitig mit der herkömmlichen Papanicolaou-Methode,Kultur und PCR auf das Vorhandensein von Trichomonas vaginalis in einigen Krankenhäusern im Süden und Westen Nigerias untersucht Nigeria.

Papanicolaou Methode

Jede Probe wurde auf einen sauberen fettfreien Schlitten verschmiert und 30 Minuten in Ether-Alkohol fixiert., Die Proben wurden dann nach der Papanicolaou-Methode wie folgt gefärbt: Harris ‚ Hämatoxylin ohne Essigsäure für 5 Minuten, in Leitungswasser gespült und in 1% Acidalcohol für 30 Sekunden differenziert und in Scotts Wasser für 2 Minuten geblüht. Abstriche wurden zu 95%Alkohol genommen und in OG6 für 2 Minuten gefärbt, in 95% Alkohol gespült und in EA 35 für 2 Minuten gefärbt. Abstriche wurden dann zu zwei Änderungen von absolutem Alkohol, Xylol und montiertem inDOL, genommen., Die gefärbten Abstriche wurden unter dem Lichtmikroskop bei niedriger und hoher Leistung untersuchtziele für das Vorhandensein von Trichomonas vaginalis und perinukleären Halo.

Untersuchung der Nasszubereitung

Jeder Watte-Applikator wurde anschließend in einem Reagenzglas mit etwa 2 mlnormaler Kochsalzlösung gespült. Der Inhalt wurde auf einen sauberen Glasschieber gegossen und unter dem Lichtmikroskop auf das Vorhandensein eines sich schnell bewegenden Organismus untersucht.

Kultur von T. vaginalis

Herstellung von Kulturmedium und Kultur

Kupferberg Trichomonas Medium wurde durch Auflösen von 23 hergestellt.,5g der KupferbergTrichomonas-Basis (QUELAB, Kanada) in 950 ml destilliertem Wasser mit Hilfe von Wärme,im Autoklaven 15 min bei 15 Ib-Druck (121°C) sterilisiert und abgekühlt. 50 ml heatinaktiviertes (55-60°C) Rinderserum wurde zugegeben. Antibiotika (Penicillin G und Streptomycin) undantifungal (Amphotericin B) wurden der Mischung zugesetzt und bei 4 ° C gelagert. Etwa 15 ml des Mediums wurden in ein Kulturrohr gegeben und 15 min auf 37°C erhitzt. Die zervikalen und vaginalen Tupferwurden in das Medium gegeben und bei 37ºC für 7 Tage inkubiert, wonach sie mikroskopisch untersucht wurden., Das Medium wurde zweimal in steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS)pH7.2 gewaschen und einer DNA-Extraktion unterzogen.

DNA-Extraktion, Primer und PCR

Die Kulturen wurden zweimal in steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung bei pH7.2 gewaschen und in 400µl T/E-Puffer suspendiert. Die DNA-Extraktion wurde unter Verwendung von SDS und Proteinase K gefolgt von TAB/NaCl durchgeführt. Das Vorhandensein von DNA wurde durch Elektrophorese vor der PCRamplifikation bestätigt. Primer basierend auf T., vaginalis-DNA wurde verwendet, um ein 300-bp-Genomstück (TIB MOLBIOL, Deutschland) zu amplifizieren, während die PCR-Reaktion mit dem Automatedthermal Cycler (Eppendorf Master Cycler Gradient) durchgeführt wurde.

Ergebnisse

Tabelle 1 Pap-Abstrich, nassen Vorbereitung und PCR –

Von den 300 untersuchten Exemplare von der Pap-Technik, 24 (8%) hatte perinukleäre halo suggestiveof T. vaginalis während der Organismen gesehen wurden in 15 (5%) von Ihnen. 30 (10%) der Speziesfielen sowohl auf T. vaginalis als auch auf perinukleären Halo., In nassen Präparaten unter dem Lichtmikroskop hatten 36(12%) der Proben T. vaginalis.

Tabelle 2 Prozentuale Empfindlichkeit im Vergleich zu Kultur und PCR

Wenn verglichen mit den positiven Ergebnissen von Kultur und PCR, nassen Vorbereitungen hatte die highestsensitivity von 81.58%), gefolgt von 65.77% von Diagnose basiert auf perinukleäre halo und T. vaginalis. Die mutmaßliche Diagnose auf der Grundlage von perinukleärem Halo allein betrug 52,63% , während die Diagnose auf der Grundlage der Identifizierung von Organismen im Pap-Abstrich 42 war.,11%

Papanicolaou ist die beste Färbemethode in der Zytologie, weil es hilft, effektiv zu unterscheidenemalignante Zellen von nicht-malignen Zellen. Es färbt auch das Zytoplasma und seinen Inhalt . Seine Fähigkeit, acidophile Materialien von basophilen Materialien zu unterscheiden, sowie seine Fähigkeit, nicht-zelluläre Substanzen wie Fibrin, Kristalle und Pigmente zu erhalten, macht es zu einem wesentlichen Faktor in der Zytologie . T. vaginalis, der Erreger der Trichomoniasis, ist der häufigste sexuell übertragbare Organismus weltweit ., Es parasitiert sowohl Männchen als auch Weibchenwo es in den frühen Stadien der Infektion manchmal asymptomatisch ist. T. vaginalis-Infektion istsagte eine Rolle bei der Entwicklung von zervikalen Neoplasien, postoperativen Infektionen und Schwangerschaftsabbrüchen sowie als Faktor für atypische entzündliche Erkrankungen des Beckens und Unfruchtbarkeit zu spielen .Es gibt auch epidemiologische und experimentelle Beweise dafür, dass Pap-Abstriche bei der Erkennung von Infektionen, die Risikofaktoren für Gebärmutterhalskrebs sind, wie dem humanen Papillomavirus, von Vorteil sind . Es gibt mehrere Methoden zur Diagnose von Trichomoniasis., Es gibt die einfachste Methode, bei der ein nasses Präparat unter dem Mikroskop untersucht wird, bei dem sich die Organismen rasch in alle Richtungen bewegen. Andere Methoden umfassen Nachtkultur, schnelle Antigentests und transkriptionsvermittelte Amplifikation und durch PCR .Pap-Abstrich ist ein routinemäßiger Screening-Test zum Nachweis von zervikalen Anomalien undpräkanzerösen dysplastischen Veränderungen des Gebärmutterhalses . Es erkennt auch bestimmte virale,bakterielle und Pilzinfektionen des Gebärmutterhalses und der Vagina ., In diesem experiment, nassen Vorbereitungen ofcervical und Vaginalabstrichen und Papanicolaou gefärbte Präparate wurden untersucht und verglichen withresults erhalten Sie von PCR nach 7 Tagen Kultur. Das Vorhandensein von perinukleären Halo im Epithelzellen wurden als vermutliche Diagnose für T. vaginalis verwendet. Pap-Abstriche sind Nasspräparationen beim Nachweis von T. vaginalis nicht überlegen, wie in den Tabellen 1 und 2 gezeigt. Kultur ist eine sehrsensitive Methode zur Erkennung von T. vaginalis, aber es ist teuer und zeitaufwendig. Es wird geschlossen, dass während T., vaginalis sollte in zervikalen und vaginalen Pap-Abstrichen berichtet werden, seine Abwesenheit in diesen Abstrichen ist kein Hinweis auf absolute Abwesenheit des Organismus beim Patienten.