mots-clés

Papanicolaou frottis, Trichomonas vaginalis, microscopie

Introduction

Trichomonas vaginalis est un protozoaire flagellé qui cause la Trichomonaisis et est la maladie sexuellement transmissible la plus curable au monde . En dehors de l’humainpapillomavirus, la trichomonase est l’infection sexuellement transmissible la plus courante aux États-Unis.États-Unis aujourd’hui. Parmi les femmes et les hommes, l’association de T., vaginalis avec l’humanel’acquisition et la transmission de l’immunodéficience ont été démontrées dans plusieurs études . Chez les femmes, la trichomonase peut jouer un rôle dans le développement de la néoplasie cervicale, des infections postopératoires et des résultats indésirables de la grossesse et comme facteur d’inflammation pelvienne atypique maladie et infertilité. Chez les hommes, la trichomonase est apparue comme une cause de nongonoccocalurethritis et comme contribuant à l’infertilité des facteurs masculins . La méthode de diagnostic la plus courante est la culture nocturne avec une plage de sensibilité de 75 à 95%., Des méthodes, telles que le test de l’antigène rapid et l’amplification médiée par la transcription, ont également été utilisées et auraient une plus grande sensibilité, mais ne sont pas largement utilisées . La présence de T. vaginalis peutégalement être diagnostiquée par PCR, en utilisant des amorces spécifiques pour GENBANK / L23861 . Le frottis de Pap estun test de dépistage de routine utilisé pour la détection d’anomalies cervicales et de modifications précancéreuses dysplasiques du col utérin . Il détecte également certaines infections virales, bactériennes et fongiquesinfections du col de l’utérus et du vagin ., Il existe également des preuves épidémiologiques et expérimentalesque les frottis de Pap sont bénéfiques pour détecter les infections qui sont des facteurs de risque associés au cancer du col utérin, tels que le virus du papillome humain . L’objectif de cette étude était de déterminer l’adaptabilité du frottis de Pap dans la détection de Trichomonas vaginalis dans les échantillons cervicaux et vaginaux.,

matériaux et méthodes

trois cents échantillons cervicaux et vaginaux dans des applicateurs à pointe de coton qui ont été envoyés pour la microscopie ont été simultanément examinés par la méthode conventionnelle de Papanicolaou,la culture et par PCR pour la présence de Trichomonas vaginalis dans certains hôpitaux du Sud et de l’ouest du Nigeria.

méthode Papanicolaou

chaque spécimen a été enduit sur une glissière propre sans graisse et fixé dans l’éther-alcool pendant 30minutes., Les échantillons ont ensuite été colorés par la méthode Papanicolaou comme suit: la shaématoxyline de Harris sans acide acétique pendant 5 minutes, rincée dans l’eau du robinet et différenciée en 1% d’alcool acide pendant 30 secondes et bleuie dans L’eau de Scott pendant 2 minutes. Les frottis ont été prélevés à 95% d’alcool et colorés dans OG6 pendant 2 minutes, rincés à 95% d’alcool et colorés dans EA 35 pendant 2 minutes. Les frottis ont ensuite été prélevés sur deux changements d’alcool absolu, le xylène et l’inDPX monté., Les frottis colorés ont été examinés au microscope optique à des objectifs de puissance faible et élevée pour la présence de Trichomonas vaginalis et de halo périnucléaire.

examen de la préparation humide

chaque applicateur à pointe de coton a ensuite été rincé dans un tube à essai contenant environ 2 ml de solution saline normale. Le contenu a été versé sur une lame de verre propre et examiné sous le lightmicroscope pour la présence d’un organismes en mouvement rapide.

Culture de T. vaginalis

préparation du milieu de culture et du milieu de culture

Kupferberg Trichomonas a été préparé en dissolvant 23.,5g de la base KupferbergTrichomonas (QUELAB, Canada) dans 950 ml d’eau distillée à l’aide de la chaleur,stérilisé dans un autoclave pendant 15 min à une pression de 15 Ib (121°C) et refroidi. 50 ml de sérum bovin heatinactivated (55-60°C) ont été ajoutés. Des antibiotiques (pénicilline G et streptomycine) etantifungal (amphotéricine B) ont été ajoutés au mélange et stockés à 4ºC. Environ 15 ml du médium a été mis dans un tube de culture et chauffé à 37°C pendant 15 min. Les écouvillons cervicaux et vaginaux ont été placés dans le milieu et incubés à 37ºC pendant 7 jours, après quoi ils ont été examinés au microscope., Le milieu a été lavé deux fois dans une solution saline stérile tamponnée au phosphate (PBS)pH7.2 et soumis à une extraction D’ADN.

extraction D’ADN, amorces et PCR

Les cultures ont été lavées deux fois dans une solution saline stérile tamponnée au phosphate à pH7, 2 et suspendues dans un tampon T / E de 400 µl. L’extraction de L’ADN a été réalisée à L’aide de la SDS et de la protéinase K, suivies par le CTAB / NaCl. La présence d’ADN a été confirmée par électrophorèse avant la PCRamplification. Amorces basées sur T., l’ADN vaginal a été utilisé pour amplifier un morceau de génome de 300 bp (TIB MOLBIOL, Allemagne) tandis que la réaction PCR a été réalisée à l’aide du cycleur thermique automatisé (gradient de cycleur maître D’Eppendorf).

résultats

Tableau 1 frottis de Pap, préparation humide et PCR

sur les 300 échantillons examinés par la technique Pap, 24 (8%) présentaient un halo périnucléaire évocateur de T. vaginalis alors que les organismes ont été vus dans 15 (5%) d’entre eux. 30 (10%) des spécimens avaient à la fois T. vaginalis et halo périnucléaire., Dans les préparations humides au microscope optique, 36 (12%) des spécimens présentaient T. vaginalis.

tableau 2 sensibilité en pourcentage par rapport à la culture et à la PCR

en comparaison avec les résultats positifs de la culture et de la PCR, les préparations humides présentaient la sensibilité la plus élevée de 81,58% suivie de 65,77% halo et t. vaginalis. Le diagnostic présomptif basé sur le halo périnucléaire seul était de 52,63% tandis que le diagnostic basé sur l’identification des organismes dans le frottis de Pap était de 42.,11%

Discussion

Le Papanicolaou est la meilleure méthode de coloration en cytologie, car il aide à différencier efficacement les cellules malignes des cellules non malignes. Il tache également le cytoplasme et son contenu . Sa capacité à différencier les matériaux acidophiles des matériaux basophiles ainsi que sa capacité à contenir des substances non cellulaires telles que la fibrine, les cristaux et les pigments en font une tache essentielle en cytologie . T. vaginalis, l’organisme responsable de la trichomonase est l’organisme sexuellement transmissible le plus commun au monde ., Il parasite les mâles et les femmesoù il est parfois asymptomatique dans les premiers stades de l’infection. L’infection à T. vaginalis estadit jouer un rôle dans le développement de la néoplasie cervicale, des infections postopératoires et des résultats de la grossesse et comme facteur de la maladie inflammatoire pelvienne atypique et de l’infertilité .Il existe également des preuves épidémiologiques et expérimentales que les frottis de Pap sont bénéfiques pour détecter les infections qui sont des facteurs de risque associés au cancer du col utérin, tels que le virus du papillome humain . Plusieurs méthodes de diagnostic de la trichomonase existent., Il y a la méthode la plus facile qui implique l’examen d’une préparation humide au microscope où les organismes sont vus se déplaçant rapidement dans toutes les directions. D’autres méthodes comprennent la culture de nuit, le test rapide d’antigène et l’amplification médiée par la transcription et par PCR .Le frottis de Pap est un test de dépistage de routine utilisé pour la détection d’anomalies cervicales etmodifications dysplasiques précancéreuses du col utérin . Il détecte également certaines infections virales, bactériennes et fongiques du col de l’utérus et du vagin ., Dans cette expérience, des préparations humides de frottis cervicaux et vaginaux et de frottis tachés de Papanicolaou ont été examinées et comparées aux résultats obtenus par PCR après 7 jours de culture. La présence de halo périnucléaire dans l’épithélialeles cellules ont été utilisées comme diagnostic présomptif pour T. vaginalis. Les frottis de Pap ne sont pas supérieurs aux préparations humides dans la détection de T. vaginalis comme indiqué dans les tableaux 1 et 2. La Culture est une trèsméthode sensible de détection de T. vaginalis, mais elle est coûteuse et prend du temps. Il est concludedthat tandis que T., vaginalis doit être signalé dans les frottis cervicaux et vaginaux, son absence dans cesles oreilles ne sont pas une indication d’absence absolue de l’organisme chez le patient.