Keywords

Papanicolaou uitstrijkjes, Trichomonas vaginalis, microscopie

Inleiding

Trichomonas vaginalis is een flagellated protozoa die Trichomonaisis veroorzaakt en is de meest voorkomende geneesbare seksueel overdraagbare aandoening ter wereld . Naast het humanpapillomavirus is trichomoniasis tegenwoordig de meest voorkomende seksueel overdraagbare infectie in de Verenigde Staten. Onder zowel vrouwen als mannen, de Vereniging van T., vaginalis met humane immunodeficiëntie acquisitie en transmissie is aangetoond in verschillende studies . Bij vrouwen kan trichomoniasis een rol spelen in de ontwikkeling van cervicale neoplasie, postoperatieve infecties en ongunstige zwangerschapsuitkomsten en als een factor in atypische bekkenontstekingsziekte en onvruchtbaarheid. Bij mannen is trichomoniasis naar voren gekomen als een oorzaak van nongonoccoccalurethritis en als bijdragend aan mannelijke factor onvruchtbaarheid . De gemeenschappelijkste methode van diagnose is via NACHTCULTUUR met een gevoeligheidswaaier van 75-95% ., De methodes, zoals het testen van het snelle antigeen en transcriptie-bemiddelde versterking, zijn ook gebruikt en worden gezegd om grotere gevoeligheid te hebben, maar zijn niet in wijdverspreid gebruik . De aanwezigheid van T. vaginalis kan ook door PCR worden gediagnosticeerd, gebruikend primers specifiek voor GENBANK / L23861 . Het uitstrijkje is een routine screening test gebruikt voor de detectie van cervicale afwijkingen en preancerousdysplastische veranderingen van de baarmoederhals . Het detecteert ook bepaalde virale, bacteriële en fungalinfecties van de baarmoederhals en vagina ., Er is ook epidemiologisch en experimenteel bewijs dat uitstrijkjes van Pap nuttig zijn bij het opsporen van infecties die risicofactoren zijn die geassocieerd zijn met baarmoederhalskanker, zoals het humaan papillomavirus . Het doel van deze studie was om de suitabiliteitvan uitstrijkje in de detectie van Trichomonas vaginalis in cervicale en vaginale specimens te bepalen.,

materialen en methoden

driehonderd cervicale en vaginale monsters in wattenstaafjes die voor Microscopie werden gestuurd, werden gelijktijdig onderzocht met de conventionele Papanicolaou-methode,kweek en PCR op de aanwezigheid van Trichomonas vaginalis in sommige ziekenhuizen in Zuid-en West-Nigeria.

Papanicolaou-methode

elk monster werd op een schoon vetvrij glaasje ingesmeerd en gedurende 30 minuten in etheralcohol gefixeerd., De monsters werden vervolgens gekleurd met de Papanicolaou-methode als volgt: Harris ‘shaematoxyline zonder azijnzuur gedurende 5 minuten, gespoeld in leidingwater en gedifferentieerd in 1% zuurcool gedurende 30 seconden en geblauwd in Scott’ s water gedurende 2 minuten. Uitstrijkjes werden genomen aan 95% alcohol en gekleurd in OG6 gedurende 2 minuten, gespoeld in 95% alcohol en gekleurd in ea 35 gedurende 2 minuten. Uitstrijkjes werden vervolgens genomen om twee veranderingen van absolute alcohol, xylene en gemonteerd inDPX., De vlekken werden onder de lichtmicroscoop bij lage en hoge powerobjectieven onderzocht op de aanwezigheid van Trichomonas vaginalis en perinucleaire halo.

onderzoek van het natte preparaat

elke applicator met watten tip werd vervolgens gespoeld in een reageerbuis met ongeveer 2 mlnormale zoutoplossing. De inhoud werd gegoten op een schone glazen dia en onderzocht onder de lichtmicroscoop op de aanwezigheid van een snel bewegende organismen.

kweek van T. vaginalis

bereiding van kweekmedium en kweek

Kupferberg Trichomonasmedium werd bereid door oplossing 23.,5g kupferbergtrichomonas base (QUELAB, Canada) in 950 ml gedestilleerd water met behulp van warmte,gesteriliseerd in een autoclaaf gedurende 15 minuten bij 15 Ib druk (121°C) en gekoeld. 50 ml heatinactivated (55-60°C) bovine serum werd toegevoegd. Antibiotica (penicilline G en streptomycine) enantifungaal (amfotericine B) werden aan het mengsel toegevoegd en bewaard bij 4ºC. Ongeveer 15ml van themedium werd in een cultuurbuis geplaatst en gedurende 15 min verwarmd tot 37°C. De cervicale en vaginale zwaden werden in het medium geplaatst en gedurende 7 dagen bij 37ºC geïncubeerd waarna ze microscopisch werden onderzocht., Het medium werd twee keer gewassen in steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS)pH7.2 en onderworpen aan DNA-extractie.

DNA-extractie, primers en PCR

de culturen werden tweemaal gewassen in steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing bij pH7.2 en gesuspendeerd in 400µl t / E-buffer. DNA-extractie werd uitgevoerd met behulp van SDS en proteïnase K gevolgd door cyctab/NaCl. De aanwezigheid van DNA werd bevestigd door elektroforese voorafgaand aan Pcramplificatie. Primers gebaseerd op T., vaginalis DNA werd gebruikt om een stuk van 300 bp van Genome (TIB MOLBIOL, Duitsland) te vergroten terwijl de PCR-reactie werd uitgevoerd gebruikend de automatedthermal cycler (Eppendorf master cycler gradiënt).

resultaten

Tabel 1 Pap-uitstrijkje, nat preparaat en PCR

van de 300 met behulp van de Pap-techniek onderzochte specimens hadden 24 (8%) perinucleaire halo-suggestie van T. vaginalis terwijl de organismen werden waargenomen in 15 (5%). 30 (10%) van de specimen hadden zowel T. vaginalis als perinucleaire halo., In natte preparaten onder de lichtmicroscoop hadden 36(12%) van de specimens T. vaginalis.

Tabel 2 gevoeligheid Percentage in vergelijking met kweek en PCR

vergeleken met positieve resultaten van kweek en PCR hadden natte preparaten de hoogste gevoeligheid van 81,58% gevolgd door 65,77% van de diagnose gebaseerd op perinucleaire halo en T. vaginalis. De vermoedelijke diagnose op basis van alleen perinucleaire halo was 52,63%, terwijl de diagnose op basis van identificatie van organismen in uitstrijkje 42% bedroeg.,11%

discussie

Papanicolaou is de beste kleuringsmethode in de cytologie, omdat het helpt bij het effectief differentiëren van maligne cellen van niet-maligne cellen. Het kleurt ook het cytoplasma en de inhoud ervan . De mogelijkheid om acidofiele materialen van basofiele materialen te onderscheiden evenals zijn capaciteit om non-cellulaire stoffen zoals fibrine, kristallen en pigmenten te bevatten, maakt tot het een essentiële vlek in cytologie . T. vaginalis, het veroorzakende organisme voor trichomoniasis is wereldwijd het meest voorkomende seksueel overdraagbare organisme ., Het parasiteert zowel mannen als vrouwenwaar het soms asymptomatisch is in de vroege stadia van de infectie. T. vaginalis infectie issaid om een rol te spelen in de ontwikkeling van cervicale neoplasie, postoperatieve infecties, en adversepregnancy uitkomsten en als een factor in atypische bekken ontstekingsziekte en onvruchtbaarheid .Er is ook epidemiologisch en experimenteel bewijs dat uitstrijkjes van Pap nuttige ontstekingen zijn die geassocieerd zijn met baarmoederhalskanker, zoals het humanpapillomavirus . Er bestaan verschillende diagnosemethoden voor trichomoniasis., Er is de gemakkelijkste methode die onderzoek van een nat preparaat onder de microscoop impliceert waar de organismen snel in alle richtingen worden gezien bewegen. Andere methodes omvatten overnight cultuur, snelle antigeen het testen, en transcriptie-bemiddelde versterking en door PCR .Pap uitstrijkje is een routine screening test gebruikt voor de detectie van cervicale afwijkingen enprecancerous dysplastische veranderingen van de baarmoederhals . Het detecteert ook bepaalde virale, bacteriële en schimmelinfecties van de baarmoederhals en vagina ., In dit experiment werden natte preparaten van Servische en vaginale uitstrijkjes en met Papanicolaou bevlekte uitstrijkjes onderzocht en vergeleken met de resultaten van PCR na 7 dagen kweek. De aanwezigheid van perinucleaire halo in de epitheelcellen werd gebruikt als een vermoedelijke diagnose voor T. vaginalis. Uitstrijkjes van Pap zijn niet superieur aan natte preparaten bij de detectie van T. vaginalis, zoals weergegeven in de tabellen 1 en 2. Cultuur is een zeer gevoelige methode om T. vaginalis te detecteren, maar het is duur en tijdrovend. Er wordt geconcludeerd dat terwijl T., vaginalis moet worden gerapporteerd in cervicale en vaginale uitstrijkjes, de afwezigheid ervan in deze jaren is geen indicatie voor absolute afwezigheid van het organisme bij de patiënt.