słowa kluczowe

Papanicolaou rozmazy, Trichomonas vaginalis, mikroskopia

wprowadzenie

Trichomonas vaginalis jest flagellated pierwotniaki, które powoduje Trichomonaisis i jest najbardziej powszechnie uleczalne choroby przenoszone drogą płciową na całym świecie . Oprócz humanpapillomavirus, rzęsistkowica jest najczęstszą infekcją przenoszoną drogą płciową w Stanach Zjednoczonych. Wśród kobiet i mężczyzn Stowarzyszenie T., vaginalis z nabywania i przenoszenia niedoboru humanimmunodeficiency wykazano w kilku badaniach . U kobiet rzęsistkowica może odgrywać rolę w rozwoju nowotworów szyjki macicy, zakażeń pooperacyjnych i niekorzystnych wyników ciąży oraz jako czynnik w atypowym zapaleniu miednicy i niepłodności. U mężczyzn rzęsistkowica pojawiła się jako przyczyna nieogniskowego zapalenia cewki moczowej i jako przyczyniająca się do niepłodności męskiego czynnika . Najczęstszą metodą diagnozowania jest hodowla nocna o zakresie czułości 75-95%., Metody, takie jak testowanie antygenu i amplifikacja za pośrednictwem transkrypcji, również były używane i są mówione, że mają większą czułość, ale nie są szeroko stosowane . Obecność T. vaginalis można również zdiagnozować za pomocą PCR, przy użyciu podkładów specyficznych dla GENBANK / L23861 . Rozmaz Pap rutynowy test przesiewowy stosowany w celu wykrycia nieprawidłowości szyjki macicy i przedcancerousdysplastycznych zmian szyjki macicy . Wykrywa również pewne wirusowe, bakteryjne i fungalinfekcje szyjki macicy i pochwy ., Istnieją również dowody epidemiologiczne i doświadczalne, że rozmazy są korzystne w wykrywaniu zakażeń, które są czynnikami ryzyka związanymi z rakiem szyjki macicy, takimi jak wirus brodawczaka ludzkiego . Celem pracy było określenie przydatności rozmazu Pap w wykrywaniu Trichomonas vaginalis w próbkach z szyjki macicy i pochwy.,

materiały i metody

trzysta próbek szyjki macicy i pochwy w aplikatorach z końcówkami waty,które zostały wysłane do mikroskopii, zostały jednocześnie zbadane konwencjonalną metodą Papanicolaou, hodowlą i PCR na obecność Trichomonas vaginalis w niektórych szpitalach w południowej i zachodniej Nigerii.

metoda Papanicolaou

każda próbka została rozmazana na czystym szkiełku beztłuszczowym i zamocowana w eterze-alkoholu przez 30 minut., Próbki były następnie barwione metodą Papanicolaou w następujący sposób: Harris ' shaematoxylin bez kwasu octowego przez 5 minut, płukane w wodzie z kranu i różnicowane w 1% kwasowo-alkoholowym przez 30 sekund i blued w wodzie Scotta przez 2 minuty. Rozmazy były pobierane do 95% alkoholu i barwione w OG6 przez 2 minuty, płukane w 95% alkoholu i barwione w EA 35 przez 2 minuty. Rozmazano następnie dwie zmiany alkoholu absolutnego, ksylen i montowany inDPX., Plamki były badane pod mikroskopem świetlnym przy niskiej i wysokiej mocy na obecność Trichomonas vaginalis i halo okołojądrowego.

badanie preparatu mokrego

każdy aplikator z końcówką waty został następnie przepłukany w probówce zawierającej około 2 ml normalnej soli fizjologicznej. Zawartość wylano na czysty szkiełko i zbadano pod mikroskopem świetlnym pod kątem obecności szybko poruszających się organizmów.

Hodowla T. vaginalis

przygotowanie pożywki hodowlanej i pożywki hodowlanej

pożywka Kupferberg Trichomonas została przygotowana przez rozpuszczenie 23.,5 g bazy KupferbergTrichomonas (QUELAB, Kanada) W 950 ml wody destylowanej za pomocą ciepła, sterylizowane w autoklawie przez 15 minut pod ciśnieniem 15 Ib (121°C) i chłodzone. Dodano 50 ml surowicy bydlęcej w temperaturze 55-60°C. Do mieszaniny dodano antybiotyki (penicylinę G i streptomycynę) oraz antyfungal (amfoterycynę B) i przechowywano w temperaturze 4ºC. Około 15 ml temedium wstawiono do tubki hodowlanej i podgrzano do 37°C przez 15 min. Wymazy z szyjki macicy i pochwy były umieszczane w pożywce i inkubowane w temperaturze 37ºC przez 7 dni, po czym zostały zbadane mikroskopowo., Podłoże przemyto dwukrotnie w sterylnej soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS)pH7. 2 i poddano ekstrakcji DNA.

ekstrakcja DNA, primery i PCR

hodowle przemyto dwukrotnie w sterylnej soli fizjologicznej buforowanej fosforanem o pH7.2 i zawieszono w buforze T / E 400µl. Ekstrakcję DNA przeprowadzono przy użyciu SDS i proteinazy K, a następnie metodą cyctab / NaCl. Obecność DNA została potwierdzona elektroforezą przed Pcrampilacją. Podkłady na bazie T., DNA pochwy wykorzystano do amplifikacji kawałka genomu 300 bp (TIB MOLBIOL, Niemcy), podczas gdy reakcja PCR została przeprowadzona za pomocą automatycznego cyklera termicznego (Gradient eppendorfa master cycler).

wyniki

organizmy obserwowano u 15 (5%) z nich. U 30 (10%) okazów występuje zarówno T. vaginalis, jak i halo okołojądrowe., W preparatach mokrych pod mikroskopem świetlnym u 36(12%) osobników stwierdzono T. vaginalis.

Tabela 2 czułość procentowa w porównaniu z hodowlą i PCR

w porównaniu z dodatnimi wynikami hodowli i PCR, preparaty mokre wykazywały najwyższą czułość wynoszącą 81,58%, a następnie 65,77% diagnozy opartej na jądrze halo i T. vaginalis. Przypuszczalna diagnoza oparta na samym halo okołojądrowym wyniosła 52,63%, podczas gdy diagnoza oparta na identyfikacji organizmów w rozmazie Pap wynosiła 42.,11%

Papanicolaou jest najlepszą metodą barwienia w cytologii, ponieważ pomaga skutecznie odróżnić komórki złośliwe od komórek niezłośliwych. Plami również cytoplazmę i jej zawartość . Jego zdolność do odróżniania materiałów acydofilnych od materiałów bazofilnych, a także jego zdolność do utrzymywania substancji pozakomórkowych, takich jak fibryna, kryształy i pigmenty, sprawia, że jest to niezbędna plama w cytologii . T. vaginalis, organizm sprawczy rzęsistkowica jest najczęstszyleczalny organizm przenoszony drogą płciową na całym świecie ., Pasożytuje zarówno u mężczyzn, jak i u kobiet, gdzie jest czasami bezobjawowa we wczesnych stadiach infekcji. Zakażenie T. vaginalis ma odgrywać rolę w rozwoju nowotworów szyjki macicy, zakażeń pooperacyjnych i wyników adversepregnancy oraz jako czynnik w atypowej chorobie zapalnej miednicy mniejszej i niepłodności .Istnieją również epidemiologiczne i doświadczalne dowody na to, że rozmazy Pap są korzystne w wykrywaniu zakażeń, które są czynnikami ryzyka związanymi z rakiem szyjki macicy, takimi jak wirus humanpapilloma . Istnieje kilka metod diagnostyki rzęsistkowica., Jest najprostszymetoda, która polega na badaniu mokrego preparatu pod mikroskopem, gdzie widać organizmy poruszające się szybko we wszystkich kierunkach. Inne metody zawierają overnight Kultury, szybki antygen Testowanie i transcription-mediated amplification i PCR .Rozmaz Pap jest rutynowym badaniem przesiewowym stosowanym w celu wykrycia nieprawidłowości szyjki macicy oraz zmian dysplastycznych w obrębie macicy szyjki macicy . Wykrywa również pewne infekcje wirusowe,bakteryjne i grzybicze szyjki macicy i pochwy ., W tym eksperymencie zbadano i porównano mokre preparaty rozmazów sercowo-pochwowych oraz rozmazów poplamionych Papanicolaou z wynikami uzyskanymi z PCR po 7 dniach hodowli. Obecność halo okołojądrowego w nabłonkach była stosowana jako przypuszczalna diagnoza T. vaginalis. Rozmazy Pap nie są lepsze od rozmazów mokrych w wykrywaniu T. vaginalis, jak pokazano w tabelach 1 i 2. Kultura jest bardzo wrażliwa metoda wykrywania T. vaginalis, ale jest kosztowna i czasochłonna. Stwierdza się, że podczas gdy T., vaginalis należy zgłaszać w rozmazach szyjki macicy i pochwy, jego nieobecność w tech Mears nie jest wskazaniem do absolutnego braku organizmu u pacjenta.