le séquençage de l’ADN est une méthode de laboratoire utilisée pour déterminer la séquence d’une Dnamolécule. La méthode a été développée par Frederick Sanger en 1975, qui a reçu plus tard le prix Nobel de chimie en 1980 pour ses contributions à la compréhension des séquences D’ADN. Par conséquent, il est souvent appelé séquençage Sanger.

dans le séquençage Sanger, L’ADN à séquencer Sert de modèle pour la synthèse de l’ADN. Une amorce D’ADN est conçue pour être un point de départ pour la synthèse D’ADN sur le brin d’ADN à séquencer., Quatre réactions individuelles de synthèse de l’ADN sont effectuées. Les quatre réactions comprennent les désoxynucléotides triphosphates normaux A, G, C et t (dNTPs), et chacune contient un faible niveau d’un des quatre didésoxynucléotides triphosphates (ddNTPs): ddATP, ddGTP,ddCTP ou ddTTP. Les quatre réactions peuvent être nommées A, G,C et T, selon laquelle des quatre ddNTPs a été inclus. Lorsqu’un ddNTP est incorporé dans une chaîne de nucléotides, la synthèse se termine. C’est parce que la molécule ddNTP manque d’un groupe hydroxyle 3′, qui est nécessaire pour former un lien avec le nucléotide suivant dans la chaîne., Étant donné que les ddNTPs sont incorporés de manière aléatoire, la synthèse se termine à de nombreuses positions différentes pour chaque réaction.

Après la synthèse, les produits des réactions A, G, C et T sont chargés individuellement dans quatre voies d’un seul gel et séparés à l’aide de la gelélectrophorèse, une méthode qui sépare les fragments d’ADN selon leur taille. Les bandes du gel sont détectées, puis la séquence est lue du bas du gel vers le haut, y compris les bandes dans les quatre voies., Par exemple, si la bande la plus basse à travers les quatre voies apparaît dans la voie de réaction A, alors le premier nucléotide de la séquence est A. Alors si la bande suivante de bas en haut apparaît dans la voie T, le deuxième nucléotide de la séquence est T, et ainsi de suite.En raison de l’utilisation de didésoxynucléotides dans les réactions, le séquençage Sanger est également appelé séquençage « didéoxy ».