mange biologiske anvendelser såsom mikrobiologi, cellekultur, blodarbejde og mange andre, der bruger celler, kræver, at vi bestemmer cellekoncentration for vores eksperiment.

celletælling er ret ligetil og kræver et tællekammer kaldet et hæmocytometer, en enhed opfundet af den franske anatom Louis-Charles Malasse.fra det 19. århundrede for at udføre blodcelletællinger. Et hæmocytometer består af et tykt glasmikroskop med et gitter af vinkelrette linjer ætset i midten., Gitteret har specificerede dimensioner, så det område, der er dækket af linjerne, er kendt, hvilket gør det muligt at tælle antallet af celler i et bestemt volumen af opløsning.

Figur 1. Et klassisk Hæmocytometer

den mest almindelige type hæmocytometer har en “H”-form indgraveret i midten, der omslutter to separate spejllignende polerede gitteroverflader og giver dækglasmonteringsområdet (Figur 1).,

indlæsning af hæmocytometeret

før start sørg for, at både hæmocytometeret og dets dækglas er rene ved at fjerne støvpartikler med linsepapir. Coverslips, der bruges til montering på hemocytometers er specielt fremstillet til at være tykkere end de konventionelle mikroskopi coverslips, fordi de skal være i stand til at overvinde overfladespændingen af en dråbe af væsken.

sørg for først at placere dækglaset over tællefladen, før cellesuspensionen lægges i., Placer derefter pipettespidsen med din prøve i en af de V-formede brønde, som i figur 2, og udvis forsigtigt prøven. Området under dækglaset fyldes ved kapillær handling. Der skal indføres tilstrækkelig væske, så den spejlede overflade kun er dækket, normalt omkring 10ll, men overfyld ikke overfladen. Du kan indlæse to prøver på et hæmocytometer, en i hver af de to gitter.

Figur 2., Indlæsning af Hæmocytometeret

det indlæste hæmocytometer placeres derefter på mikroskopstadiet, og tællergitteret bringes i fokus ved lav effekt. Lad prøven afregne i et par minutter og undgå at flytte dækglasset, da det kan introducere luftbobler og gøre tællingen vanskelig.

tælling af celler i et hæmocytometer

det fulde gitter på et hæmocytometer indeholder ni firkanter, der hver er 1 mm2 (figur 3). Det centrale tælleområde af hæmocytometeret (figur 3B) indeholder 25 store firkanter, og hver stor firkant har 16 mindre firkanter., Når du tæller, skal du kun tælle disse celler på linjerne på to sider af det store firkant for at undgå at tælle celler to gange (figur 3G). Suspensioner skal fortyndes nok, så cellerne eller andre partikler ikke overlapper hinanden på gitteret og bør fordeles ensartet.

Figur 3. Tæller celler på Hæmocytometeret.

for at skelne mellem døde og levedygtige celler fortyndes prøven ofte med en bestemt plet, såsom Trypan blue., Denne farvningsmetode, også kendt som farvning af farvestofudelukkelse, bruger et dia .ofarvestof, der selektivt trænger ind i cellemembraner fra døde celler, farve dem blå, mens det ikke absorberes af membraner fra levende celler, hvilket udelukker levende celler fra farvning. Når de ses under et mikroskop, vises døde celler som Mørkeblå (figur 4)

figur 4. Trypan blå udelukkelse af levende celler på Hæmocytometeret. (Pilen angiver optagelse af farvestof på tværs af membranen af døde celler.,)

for At udføre den tæller, bestemme forstørrelse er nødvendige for at genkende den ønskede celletype og systematisk at tælle celler i udvalgte pladser, så det samlede antal er ca 100 celler, et minimum antal af celler, der er nødvendige for en statistisk signifikant tæller.

for store celler kan du blot tælle cellerne inde i de fire store hjørnekvadrater (figur 3C-F) og den midterste (figur 3B). For en tæt suspension af små celler kan du ønske at tælle cellerne i de fire ydre og midterste firkanter på det centrale firkant (figur 3B) eller lave en mere fortyndet suspension.,

husk, om en celle overlapper en afgørelse, tæl den som “in”, hvis den overlapper den øverste eller højre afgørelse, og “out”, hvis den overlapper den nederste eller venstre afgørelse (figur 3G).

arealet af den midterste (figur 3B) og hvert hjørne firkant (figur 3C-f) er 1 mm 1 1 mm = 1 mm2: dybden af hver firkant er 0,1 mm. det endelige volumen af hver firkant på denne dybde er 100nl.,

Når du har fået den samlede blodlegemer, arbejdsmiljøkrav kan beregnes ud fra følgende formel:

Så, for eksempel, hvis du fortyndet din prøve 1:1 med Trypan blue, og du talt 325 celler i 4 hjørne pladser plus den centrale store torv, alt celler per ml =

Hvis du ønsker at vide, hvor mange celler du har i din oprindelige prøve, bare gange celle koncentration af total sample volume. For eksempel, hvis din oprindelige prøvevolumen er 5 ml, har din prøve en total =