DNA-sekventering er en laboratoriemetode, der bruges til at bestemme sekvensen af et Dnamolekyle. Metoden blev udviklet af Frederick Sanger i 1975, som blev senereuddelt Nobelprisen i kemi i 1980 for sine bidrag tilforståelse af DNA-sekvenser. Derfor, det er ofte omtalt som Sanger sekventering.

i Sanger-sekventering skal DNA ‘ et sekventeresfungerer som en skabelon til DNA-syntese. En DNA primer er designet til at være astarting punkt for DNA-syntese på strengen af DNA, der skal sekventeres., Fireindividuelle DNA-syntesereaktioner udføres. De fire reaktioner includenormal A, G, C og T deoxynucleotide trifosfater (dntp ‘ er), og hver containsa lavt niveau af en af de fire dideoxynucleotide trifosfater (ddNTPs): ddATP,ddGTP, ddCTP, eller ddTTP. De fire reaktioner kan kaldes A, G,C og T, ifølge hvilken af de fire ddNTP ‘ er var inkluderet. Når en ddNTP erinkorporeret i en kæde af nukleotider, slutter syntesen. Dette skyldes, at ddNTP-molekylet mangler en 3 ‘ hydro .ylgruppe, som kræves for at danne et link til det næste nukleotid i kæden., Da ddNTP ‘ erne er tilfældigt inkorporeret, slutter syntesen i mange forskellige positioner for hverreaktion.

efter syntese indlæses produkterne fra A -, G -, C-og T-reaktionerne individuelt i fire baner af en enkelt gel og adskilles under anvendelse af gelelektroforese, en metode, der adskiller DNA-fragmenter efter deres størrelser. Gelens bånd detekteres, og så læses sekvensen fra bunden afgelen til toppen, herunder bånd i alle fire baner., For eksempel, hvis thelowest band på tværs af alle fire vognbaner vises i En reaktion lane, så de første nukleotid i den rækkefølge, er A. Så hvis det næste band fra bund til topappears i T lane, den anden nukleotider i sekvensen, er T, og så videre.På grund af brugen af dideo .ynukleotider i reaktionerne er Sanger sekventeringogså kaldet “dideo .y” sekventering.