Søgeord

Papanicolaou pletter, Trichomonas vaginalis, mikroskopi

Indledning

Trichomonas vaginalis er en flagellated protozo, som forårsager Trichomonaisis og er mostcommon helbredes seksuelt overførte sygdom i verden . Bortset fra humanpapillomavirus er trichomoniasis den mest almindelige seksuelt overførte infektion i De Forenede Stater i dag. Blandt både kvinder og mænd er foreningen T., vaginalis med humanimmundefekt erhvervelse og transmission er blevet vist i flere undersøgelser . Ikvinder kan trichomoniasis spille en rolle i udviklingen af cervikal neoplasi, postoperative infektioner og negative graviditetsresultater og som en faktor i atypisk bækkenbetændelsesygdom og infertilitet. Hos mænd, trichomoniasis har vist sig som en årsag til nongonoccocalurethritis og som bidrager til mandlig faktor infertilitet . Den mest almindelige metode tildiagnose er via overnight kultur med et følsomhedsområde på 75-95% ., Metoder, såsom hurtig antigen test og transkriptionsmedieret amplifikation, er også blevet anvendt og siges at have større følsomhed, men er ikke i udbredt anvendelse . Tilstedeværelsen af T. vaginalis kanogså diagnosticeres ved PCR, ved anvendelse af primere specifikke for GENBANK / l23861 . Pap-udstrygningen eren rutinemæssig screeningstest, der anvendes til påvisning af cervikale abnormiteter og precancerousdysplastiske ændringer i livmoderhalsen . Det registrerer også visse virale, bakterielle og svampeinfektioner i livmoderhalsen og vagina ., Der er også epidemiologiske og eksperimentelle beviserat Papudstrygninger er gavnlige til at detektere infektioner, der er risikofaktorer forbundet med cervicalcancer, såsom humant papillomavirus . Formålet med denne undersøgelse var at bestemme egnethedenaf Pap-udstrygning ved påvisning af Trichomonas vaginalis i cervikale og vaginale prøver.,

Materialer og Metoder

Tre hundrede livmoderhalskræft og vaginal prøver i bomuld, uld tippet montører, som blev sentfor mikroskopi blev samtidig undersøgt af den konventionelle Papanicolaou metode,kultur og ved PCR for tilstedeværelse af Trichomonas vaginalis i nogle hospitaler i det Sydlige andWestern Nigeria.

Papanicolaou metode

hver prøve blev smurt på en ren fedtfri objektglas og fastgjort i ether-alkohol i 30 minutter., Prøverne blev derefter farves af den Papanicolaou metode som følger: Harris’shaematoxylin uden eddikesyre i 5 minutter, skylles i vand fra hanen og differentieret i 1% acidalcoholfor 30 sekunder og blued i Scotts vand i 2 minutter. Udstrygninger blev taget til 95%alkohol og farves i OG6 i 2 minutter, skylles i 95% alkohol og farves i ea 35 i 2 minutter. Udstrygninger blev derefter taget til to ændringer af absolut alkohol, xylen og monteret INDP.., De farvede udstrygninger blev undersøgt under lysmikroskopet ved lav og høj effektmål for tilstedeværelsen af Trichomonas vaginalis og perinuclear halo.

undersøgelse af vådt præparat

hver applikator med bomuldsuldspidser blev derefter skyllet i et reagensglas indeholdende cirka 2 ml normalt saltvand. Indholdet blev hældt på en ren glasskinne og undersøgt under lysmikroskopet for tilstedeværelsen af en hurtigt bevægende organismer.

kultur af T. vaginalis

fremstilling af dyrkningsmedium og kultur

Kupferberg Trichomonas medium blev fremstillet ved opløsning af 23.,5g af KupferbergTrichomonas-basen (Canadauelab, Canada) i 950 ml destilleret vand ved hjælp af varme,steriliseret i en autoklav i 15 minutter ved 15 Ib-tryk (121.C) og afkølet. 50 ml varmeinaktiveret (55-60 C C) bovint serum blev tilsat. Antibiotika (penicillin G og streptomycin) ogantifungal (Amphotericin B) blev tilsat til blandingen og opbevaret ved 4CC. 15 ml afmedium blev sat i et kulturrør og opvarmet til 37.C i 15 minutter. De cervicale og vaginale svaberblev anbragt i mediet og inkuberet ved 37CC i 7 dage, hvorefter de blev undersøgt mikroskopisk., Mediet blev vasket to gange i sterilt phosphatbufret saltvand (PBS)pH7.2 og underkastet DNA-ekstraktion.

DNA-ekstraktion, primere og PCR

kulturerne blev vasket to gange i sterilt phosphatbufret saltvand ved pH7.2 og suspenderet in400ll T / E buffer. DNA-ekstraktion blev udført under anvendelse af SDS og proteinase K efterfulgt af cyctab / NaCl. Tilstedeværelsen af DNA blev bekræftet ved elektroforese før Pcramplificering. Primere baseret på T., vaginalis-DNA blev brugt til at forstærke en 300 bp stykke ofgenome (TIB MOLBIOL, Tyskland), mens PCR-reaktionen blev udført ved hjælp af den automatedthermal cycler (Eppendorf master cycler gradient).

Resultater

Tabel 1 celleprøve, våd forberedelse og PCR

Af 300 prøver undersøgt af Pap-teknik, 24 (8%) havde perinuclear halo suggestiveof T. vaginalis, mens organismer, der blev set i 15 (5%) af dem. 30 (10%) af prøverne havde både T. vaginalis og perinuclear halo., I våde præparater under lysmikroskopet havde 36(12%) af prøverne T. vaginalis.

Tabel 2 Procent følsomhed i sammenligning med kultur og PCR

sammenlignet med positive resultater for kultur og PCR, våd forberedelserne havde highestsensitivity af 81.58% efterfulgt af 65.77% af diagnose baseret på perinuclear halo og T. vaginalis. Presumptiv diagnose baseret på perinuclear halo alene var 52.63%, mens diagnosebaseret på identifikation af organismer i Pap-udstrygning var 42.,11%

Diskussion

Papanicolaou er den bedste farvningsmetode i cytologi, fordi det hjælper med effektivt at differentieremaligne celler fra ikke-maligne celler. Det pletter også cytoplasmaet og dets indhold . Dens evne til at differentiere acidofile materialer fra basofile materialer såvel som dets evne til at opretholde ikke-cellulære stoffer som fibrin, krystaller og pigmenter gør det til en vigtig plet i cytologi . T. vaginalis, den forårsagende organisme for trichomoniasis er den mest almindeligehærdelig seksuelt overført organisme over hele verden ., Det parasiterer både mænd og kvinderhvor det undertiden er asymptomatisk i de tidlige stadier af infektionen. T. vaginalis-infektion issaid til at spille en rolle i udvikling af cervikal neoplasi, postoperative infektioner, og adversepregnancy resultater og som en faktor i atypiske underlivsbetændelse og barnløshed .Der er også epidemiologiske og eksperimentelle beviser for, at Pap-udstrygninger er gavnlige idetektere infektioner, der er risikofaktorer forbundet med livmoderhalskræft, såsom humanpapilloma virus . Der findes flere metoder til diagnose af trichomoniasis., Der er den nemmestemetode, der indebærer undersøgelse af et vådt præparat under mikroskopet, hvor organismerne ses bevæge sig hurtigt i alle retninger. Andre metoder omfatter natten kultur, hurtig antigen test, og transkription-medieret amplifikation og ved PCR .Pap smear er en rutinemæssig screeningstest, der anvendes til påvisning af cervikale abnormiteter ogforkert dysplastiske ændringer i livmoderhalsen . Det registrerer også visse virale, bakterielle og svampeinfektioner i livmoderhalsen og vagina ., I dette forsøg blev våde præparater afcervikale og vaginale udstrygninger og Papanicolaou farvede udstrygninger undersøgt og sammenlignet medresultater opnået fra PCR efter 7 dages kultur. Tilstedeværelsen af perinuclear halo i epithelenceller blev anvendt som en formodentlig diagnose for T. vaginalis. Pap-udstrygninger er ikke bedre end vådtpræparater til påvisning af T. vaginalis som vist i tabel 1 og 2. Kultur er en megetfølsom metode til at detektere T. vaginalis, men det er dyrt og tidskrævende. Det konkluderes, at mens T., vaginalis skal rapporteres i cervikale og vaginale Papudstrygninger, dets fravær i dissesmears er ikke en indikation for absolut fravær af organismen i patienten.