Keywords

Papanicolaou smears, Trichomonas vaginalis, microscopy

Introducción

Trichomonas vaginalis es un protozoo flagelado que causa Trichomonaisis y es la enfermedad de transmisión sexual más común en todo el mundo . Aparte del virus del papiloma humano, la tricomoniasis es la infección de transmisión sexual más común en los Estados Unidos hoy en día. Entre mujeres y hombres, la asociación de T., vaginalis con adquisición y transmisión de inmunodeficiencia humana se ha demostrado en varios estudios . En las mujeres, la tricomoniasis puede desempeñar un papel en el desarrollo de neoplasia cervical, infecciones postoperatorias y resultados adversos del embarazo y como un factor en la inflamación pélvica atípica enfermedad e infertilidad. En los hombres, la tricomoniasis ha surgido como una causa de nongonococaluretritis y como contribución a la infertilidad del factor masculino . El método más común de diagnóstico es a través de cultivo nocturno con un rango de sensibilidad de 75-95% ., También se han utilizado métodos, como la prueba de antígenos rápidos y la amplificación mediada por la transcripción, y se dice que tienen una mayor sensibilidad, pero no están en uso generalizado . La presencia de T. vaginalis también puede ser diagnosticada por PCR, utilizando cebadores específicos para GENBANK / L23861 . La prueba de Papanicolaou es una prueba de detección rutinaria utilizada para la detección de anomalías cervicales y cambios displásicos precancerosos del cuello uterino . También detecta ciertas infecciones virales, bacterianas y fungales del cuello uterino y la vagina ., También hay evidencia epidemiológica y experimental de que las pruebas de Papanicolaou son beneficiosas para detectar infecciones que son factores de riesgo asociados al cáncer de cuello uterino, como el virus del papiloma humano . El objetivo de este estudio fue determinar la idoneidad del Papanicolaou en la detección de Trichomonas vaginalis en muestras cervicales y vaginales.,

materiales y métodos

trescientas muestras cervicales y vaginales en aplicadores con punta de algodón que se enviaron para microscopía fueron examinadas simultáneamente por el método convencional de Papanicolaou,cultivo y por PCR para la presencia de Trichomonas vaginalis en algunos hospitales del Sur y oeste de Nigeria.

método de Papanicolaou

cada espécimen fue untado en un portaobjetos limpio y libre de grasa y fijado en éter-alcohol durante 30 minutos., Los especímenes fueron teñidos por el método Papanicolaou de la siguiente manera: saematoxilina de Harris sin ácido acético durante 5 minutos, enjuagada en agua del grifo y diferenciada en alcohol ácido al 1% durante 30 segundos y azulada en agua de Scott durante 2 minutos. Los frotis se tomaron al 95% de alcohol y se teñieron en OG6 durante 2 minutos, se enjuagaron en alcohol al 95% y se teñieron en EA 35 durante 2 minutos. Los frotis fueron luego llevados a dos cambios de alcohol absoluto, xileno e indpx montado., Los frotis teñidos se examinaron bajo el microscopio de luz a objetivos de baja y alta potencia para detectar la presencia de Trichomonas vaginalis y halo perinuclear.

examen de la preparación húmeda

Cada aplicador con punta de algodón se enjuagó posteriormente en un tubo de ensayo que contenía aproximadamente 2 ml de solución salina normal. El contenido se vertió en un portaobjetos de vidrio limpio y se examinó bajo el microscopio de luz para detectar la presencia de organismos que se movían rápidamente.

cultivo de T. vaginalis

preparación del medio de cultivo y cultivo

el medio de Kupferberg Trichomonas fue preparado por disolución 23.,5g de la base KupferbergTrichomonas (Quelab, Canadá) en 950 ml de agua destilada con ayuda de calor,esterilizada en autoclave durante 15 min a 15 Ib de presión (121°C) y enfriada. Se añadieron 50 ml de suero bovino heatinactivado (55-60°C). Se añadieron antibióticos (penicilina G y estreptomicina) y antifúngicos (anfotericina B) a la mezcla y se almacenaron a 4ºC. Alrededor de 15ml de themedium se puso en un tubo de cultivo y se calentó a 37°C durante 15 min. Los hisopos cervicales y vaginales se colocaron en el medio y se incubaron a 37ºC durante 7 días después de lo cual se examinaron microscópicamente., El medio se lavó dos veces en solución salina tamponada de fosfato estéril (PBS)pH7. 2 y se sometió a extracción de ADN.

extracción de ADN, cebadores y PCR

los cultivos fueron lavados dos veces en solución salina tamponada de fosfato estéril a pH7.2 y suspendidos en 400µl t/e tampón. La extracción de ADN se realizó con SDS y proteinasa K seguida por Cctab/NaCl. La presencia de ADN se confirmó mediante electroforesis previa a la Pcramplificación. Primers basados en T., el ADN de vaginalis se utilizó para amplificar una pieza de genoma de 300 PB (TIB MOLBIOL, Alemania) mientras que la reacción de PCR se realizó utilizando el ciclador térmico automático (Eppendorf master cycler gradient).

resultados

Tabla 1 Papanicolaou, preparación húmeda y PCR

de las 300 muestras examinadas por la técnica de Papanicolaou, 24 (8%) tenían Halo perinuclear sugerido de T. vaginalis mientras que los organismos se observaron en 15 (5%) de ellos. 30 (10%) de los especímenes tenían T. vaginalis y halo perinuclear., En preparaciones húmedas bajo el microscopio de luz, 36 (12%) de las muestras tenían T. vaginalis.

Tabla 2 porcentaje de sensibilidad en comparación con cultivo y PCR

cuando se compara con resultados positivos de cultivo y PCR, las preparaciones húmedas tuvieron la sensibilidad más alta de 81,58% seguido de 65,77% de diagnóstico basado en perinuclear halo and T. vaginalis. El diagnóstico presuntivo basado en el halo perinuclear solo fue de 52,63%, mientras que el diagnóstico basado en la identificación de organismos en la prueba de Pap fue de 42.,11%

discusión

Papanicolaou es el mejor método de tinción en citología, ya que ayuda a diferenciar eficazmente las células alineadas de las células no malignas. También tiñe el citoplasma y su contenido . Su capacidad para diferenciar los materiales acidofílicos de los basofílicos, así como su capacidad para contener sustancias no celulares como fibrina, cristales y pigmentos, lo convierte en una tinción esencial en citología . T. vaginalis, el organismo causante de la tricomoniasis es el organismo de transmisión sexual más común del mundo ., Parasita tanto a hombres como a mujeres, donde a veces es asintomática en las primeras etapas de la infección. La infección por T. vaginalis se dice que juega un papel en el desarrollo de neoplasia cervical, infecciones postoperatorias y resultados adversos en el embarazo y como un factor en la enfermedad inflamatoria pélvica atípica y la infertilidad .También hay pruebas epidemiológicas y experimentales de que las pruebas de Papanicolaou son beneficiosas para la detección de infecciones que son factores de riesgo asociados con el cáncer de cuello uterino, como el virus del papiloma humano . Existen varios métodos de diagnóstico de tricomoniasis., Existe el método más fácil que implica el examen de una preparación húmeda bajo el microscopio donde losorganismos se ven moviéndose rápidamente en todas las direcciones. Otros métodos incluyen cultivo nocturno, pruebas rápidas de antígeno y amplificación mediada por transcripción y por PCR .La prueba de Papanicolaou es una prueba de detección de rutina que se utiliza para la detección de anomalías cervicales y cambios displásicos recurrentes del cuello uterino . También detecta ciertas infecciones virales, bacterianas y fúngicas del cuello uterino y la vagina ., En este experimento, se examinaron las preparaciones húmedas de frotis cervical y vaginal y frotis teñidos de Papanicolau y se compararon con los resultados obtenidos de PCR después de 7 días de cultivo. Se utilizó la presencia de halo perinuclear en las células epiteliales como diagnóstico presuntivo de T. vaginalis. Las pruebas de Papanicolaou no son superiores a las preparaciones húmedas en la detección de T. vaginalis, como se muestra en las tablas 1 y 2. El cultivo es un método muy sensible para detectar T. vaginalis, pero es costoso y requiere mucho tiempo. Se concluye que mientras T., vaginalis se debe informar en las pruebas de Papanicolaou cervicales y vaginales, su ausencia en estosmaños no es una indicación de ausencia absoluta del organismo en el paciente.