resumen

la ligasa de ADN de E. coli es un polipéptido de peso molecular 75,000. La enzima comparable inducida por T4 es algo más pequeña (63.000 a 68.000). Ambas enzimas catalizan la síntesis de enlaces fosfodiéster entre los grupos adyacentes 5 ‘- fosforilo y 3 ‘ – hidroxilo en ADN dúplex nicked, acoplado a la escisión del enlace pirofosfato de DPN (E. coli) o ATP (T4)., La síntesis de enlaces fosfodiéster catalizada por ambas enzimas ocurre en una serie de estos pasos discretos e implica la participación de dos intermedios covalentes (Fig. 1). Un análisis cinético en estado estacionario de la ligasa de E. coli catalizada por reacción apoya este mecanismo, y demuestra además que la enzima-adenilato y el ADN-adenilato son intermediarios cinéticamente significativos en el camino directo de la síntesis de enlaces fosfodiéster.

una cepa de E. coli con una mutación en el gen estructural de la ADN ligasa que resulta en la síntesis de una enzima anormalmente termolábil es inviable a 42 ° C., Aunque es capaz de crecer a 30 ° C, el mutante sigue siendo defectuoso a esta temperatura en su capacidad de reparar el daño a su ADN causado por la irradiación ultravioleta y por agentes alquilantes. A 42 ° C, todo el ADN recientemente replicado está en forma de «fragmentos de Okazaki» cortos de 10s, una indicación de que la razón del fracaso del mutante para sobrevivir bajo estas condiciones es su incapacidad para sostener el paso de ligadura que es esencial para la síntesis discontinua del cromosoma E. coli. La ligasa de la DNA es por lo tanto una enzima esencial requerida para la replicación y la reparación normales de la DNA en E. coli., Las ligasas de ADN purificadas han demostrado ser reactivos útiles en la construcción in vitro de moléculas de ADN recombinantes.