la secuenciación de ADN es un método de laboratorio utilizado para determinar la secuencia de una Dnamolécula. El método fue desarrollado por Frederick Sanger en 1975, quien fue posteriormente galardonado con el Premio Nobel de química en 1980 por sus contribuciones tounderstanding secuencias de ADN. En consecuencia, a menudo se conoce como secuenciación de Sanger.

en la secuenciación de Sanger, el ADN a secuenciar sirve como una plantilla para la síntesis de ADN. Un cebador de ADN está diseñado para ser un punto de partida para la síntesis de ADN en la cadena de ADN a secuenciar., Se realizan cuatro reacciones de síntesis de ADN individuales. Las cuatro reacciones incluyen trifosfatos de desoxinucleótido normales A, G, C y t (dNTPs), y cada una contiene un nivel bajo de uno de los cuatro trifosfatos de dideoxinucleótido (ddNTPs): ddATP, ddGTP, ddCTP o ddTTP. Las cuatro reacciones pueden denominarse A, G, C y T, según cuál de las cuatro ddNTPs se incluyó. Cuando un ddNTP está incorporado en una cadena de nucleótidos, la síntesis termina. Esto se debe a que la molécula ddNTP carece de un grupo hidroxilo 3′, que se requiere para formar un enlace con el siguiente nucleótido en la cadena., Dado que los ddNTPs están incorporados aleatoriamente, la síntesis termina en muchas posiciones diferentes para cada reacción.

Después de la síntesis, los productos de las reacciones A, G, C y T se cargan individualmente en cuatro carriles de un solo gel y se separan mediante gelelectroforesis, un método que separa los fragmentos de ADN por sus tamaños. Se detectan las bandas del gel, y luego se lee la secuencia desde la parte inferior del gel hasta la parte superior, incluidas las bandas en los cuatro carriles., Por ejemplo, si la banda inferior a través de los cuatro carriles aparece en el carril de reacción A, entonces el primer nucleótido en la secuencia es A. Entonces si la siguiente banda de abajo hacia arriba aparece en el carril T, el segundo nucleótido en la secuencia es T, y así sucesivamente.Debido al uso de dideoxinucleótidos en las reacciones, la secuenciación de Sanger también se llama secuenciación «dideoxi».