Monet biologiset sovellukset, kuten mikrobiologian, solu-kulttuuri, verikokeet ja monet muut, jotka käyttävät solut vaativat, että me määrittää solun pitoisuus kokeeseen.

Solu laskenta on melko yksinkertaista ja vaatii counting jaosto kutsutaan hemocytometer, laite, keksi 19th century ranskalainen anatomi Louis-Charles Malassez suorittaa verenkuvan. Hemosytometri koostuu paksusta lasimikroskoopista, jonka keskelle on kaiverrettu kohtisuorien viivojen verkko., Ruudukko on määritellyt mitat siten, että rivien peittämä pinta-ala on tiedossa, mikä mahdollistaa solujen määrän laskemisen tiettyyn liuosmäärään.

Kuva 1. Klassinen Hemocytometer

yleisin hemocytometer on ”S” muoto kaiverrettu keskellä, joka pitää sisällään kaksi erillistä peili-kuin kiiltävä grid pinnat ja tarjoaa kattavat slip asennus alue (Kuva 1).,

lastaa hemocytometer

Ennen kuin aloitat varmista, että sekä hemocytometer ja sen peitinlasin ovat puhtaat poistamalla kaikki pöly hiukkasia, joiden linssi paperi. Coverslips, että käytetään asennus hemocytometers ovat erityisesti tehty paksumpi kuin perinteinen mikroskopointi coverslips, koska ne on voitava voittaa pintajännityksen pisara nestettä.

varmista ensin asettaa peitinlasin yli laskenta pinta ennen lastausta solususpensiota., Aseta sitten pipetin kärki näytteesi kanssa johonkin V-muotoiseen kuoppaan, kuten kuvassa 2, ja poista näyte varovasti. Poukaman alla oleva alue täyttyy kapillaarivaikutuksella. Nestettä tulee ottaa riittävästi, jotta peilipinta on juuri peitetty, yleensä noin 10 µl, mutta älä täytä pintaa liikaa. Voit ladata kaksi näytettä yhdellä hemosytometrillä, yksi kumpaankin kahdesta ruudukosta.

Kuva 2., Lastaus Hemocytometer

ladattu hemocytometer on sitten sijoitettu mikroskoopilla vaiheessa ja laskenta verkkoon on tuotu keskittyä vähän virtaa. Anna näytteen asettua pariksi minuutiksi ja vältä poukaman siirtämistä, sillä se saattaa aiheuttaa ilmakuplia ja vaikeuttaa laskemista.

Laskenta solujen hemocytometer

koko ruudukko on hemocytometer sisältää yhdeksän ruutua, joista jokainen on 1 mm2 (Kuva 3). Hemosytometrin (kuva 3B) keskuslaskenta-alueella on 25 suurta neliötä ja jokaisessa Isossa neliössä on 16 pienempää neliötä., Laskettaessa lasketaan vain ne solut suuren neliön kahden sivun viivoilla, jottei soluja lasketa kahdesti (Kuva 3G). Keskeytykset olisi laimennetaan tarpeeksi, niin että solut tai muut hiukkaset eivät ole päällekkäisiä toisiaan verkkoon, ja pitäisi olla tasaisesti jakautunut.

Kuva 3. Lasketaan soluja Hemosytometrillä.

erottaa kuolleita ja eläviä soluja, näyte usein laimennetaan tiettyyn tahra, kuten Trypan blue., Tämä värjäytyminen menetelmä, joka tunnetaan myös nimellä väriaineen syrjäytymisen värjäys, käytetään diatso väriaine, joka valikoivasti tunkeutuu solukalvon kuolleita soluja, väritys niitä sininen, ottaa huomioon, että se ei imeydy limakalvojen eläviä soluja, mikä ottamatta eläviä soluja värjäystä. Kun tarkastella mikroskoopilla, kuolleet solut näkyvät tumman sininen (Kuva 4)

Kuva 4. Trypan Blue poissulkeminen elävien solujen Hemocytometer. (Nuoli osoittaa väriaineen imeytymisen kuolleiden solujen kalvoon.,)

suorita laskea, määrittää suurennuksen tarvitaan tunnistamaan halutun solun tyypin ja järjestelmällisesti laskea solujen valitut ruudut niin, että yhteenlaskettu määrä on noin 100 solua, vähintään määrä soluja tarvitaan tilastollisesti merkittävä määrä.

suuria soluja, voit yksinkertaisesti laskea solujen sisällä neljän suuren kulman neliöt (Kuva 3C-F) ja keskimmäinen (Kuva 3B). Sillä tiheä jousitus pienten solujen voit halutessasi laskea solujen neljä ulko-ja keski neliöt central square (Kuva 3B) tai tehdä enemmän laimenna jousitus.,

Muistakaa, että jos solun päällekkäisyyksiä päätöksen, laske sitä ”” jos se peittää ylä-tai oikea tuomio, ja ”out”, jos se on päällekkäinen alas tai vasemmalta tuomio (Kuva 3G).

– alueen keskellä (Kuva 3B) ja jokaisessa kulmassa neliön (Kuva 3C-F) on 1 mm x 1 mm = 1 mm2: syvyys kunkin neliö on 0,1 mm. Lopullinen määrä kunkin neliön syvyydessä on 100nl.,

Kun olet saanut koko solumäärä, solujen pitoisuus voidaan laskea seuraavalla kaavalla:

Niinpä esimerkiksi, jos sinulla laimennettu näyte 1:1 Trypan blue, ja voit laskea 325 solujen 4 kulman neliöt sekä keski-iso neliö, yhteensä solua / ml =,

Jos haluat tietää, kuinka monta solua on alkuperäinen näyte, vain moninkertaistaa solujen pitoisuus, jonka koko näytteen tilavuus. Jos esimerkiksi alkuperäinen näytteen tilavuus on 5 ml, näytteen kokonaisarvo on