Tiivistelmä

DNA ligase E. coli on polypeptidi, joiden molekyylipaino on enintään 75 000. Vastaava T4-indusoitu entsyymi on jonkin verran pienempi (63 000-68 000). Molemmat entsyymit katalysoivat synteesi phosphodiester joukkovelkakirjojen vierekkäisten 5′-phosphoryl ja 3′-hydroksyyli-ryhmien pölli duplex DNA, joka on kytketty pilkkominen pyrofosfaatin side DPN (E. coli) tai ATP (T4)., Phosphodiester sidos synteesi katalysoivat sekä entsyymejä esiintyy useita erillisiä vaiheita ja siihen osallistuu kaksi kovalenttinen välituotteita (Fig. 1). Vakaassa tilassa kineettinen analyysi reaktio katalysoivat E. coli-ligase tukee tätä mekanismia, ja osoittaa edelleen, että entsyymi-adenylate ja DNA-adenylate ovat kinetically merkittäviä välituotteiden suora polku phosphodiester sidos synteesi.

kanta E. coli-mutaatio rakenteellisen geenin DNA-ligaasia, joka johtaa synteesi poikkeuksellisen thermolabile entsyymi on elämättömiä 42°C., Vaikka mutantti pystyy kasvamaan 30°C: ssa, sen kyky korjata ultraviolettisäteilyn ja alkyloivien aineiden aiheuttamia vaurioita DNA: ssaan on edelleen puutteellinen tässä lämpötilassa. 42°C, kaikki äskettäin monistaa DNA: ta on muodossa lyhyt 10S ”Okazaki fragmentteja,” osoitus siitä, että syy mutantti on vika selviytyä näissä olosuhteissa on sen kyvyttömyys ylläpitää sitomiseen vaihe, joka on välttämätön epäjatkuva synteesiä E. coli-kromosomi. DNA-ligaasi on siis välttämätön entsyymi, jota tarvitaan normaalin DNA-replikaation ja E. coli-bakteerin korjaamisen kannalta., Puhdistettu DNA-ligaasit ovat osoittautuneet hyödyllisiksi reagenssit rakentamisen in vitro-yhdistelmä-DNA-molekyylejä.