Seuraavan sukupolven sekvensointi

Johdanto

sekvensointi ihmisen genomin valmistui vuonna 2003, kun 13 vuotta kansainvälistä yhteistyötä ja investointeja 3 miljardia DOLLARIA. Human Genome Project käyttää Sanger sekvensointi (vaikkakin raskaasti optimoitu), pääasiallinen menetelmä DNA: n sekvensointi, koska sen keksintö 1970-luvulla.

Tänään, kysyntä sekvensointi kasvaa eksponentiaalisesti, jossa on suuri määrä genomista DNA: ta tarvitse analysoida nopeasti, edullisesti ja tarkasti., Uusien sekvensointiteknologioiden, jotka tunnetaan yhdessä nimellä seuraavan sukupolven sekvensointi, ansiosta on nyt mahdollista sekvensoida kokonainen ihmisen genomi muutamassa tunnissa.

Sanger sekvensointi ja Seuraavan sukupolven sekvensointi

toimintaperiaate Seuraavan Sukupolven Sekvensointi (NGS) on samanlainen kuin Sanger sekvensointi, joka perustuu kapillaari elektroforeesi. Genomista strand on hajanainen, ja perustaa kunkin fragmentti on merkitty lähetettyjä signaaleja, kun fragmentit ligoitiin vastaan mallin strand.,
Sanger-menetelmällä tarvitaan erilliset vaiheet sekvensointi, erottaminen (elektroforeesilla) ja havaitseminen, joka oli vaikea automatisoida näytteen valmistelussa ja se oli rajoitettu suorituskyky, skaalautuvuus ja resoluutio. NGS-menetelmää käyttää joukko-perustuu sekvensointi, joka yhdistää tekniikoita kehitetään Sanger sekvensointi käsitellä miljoonia reaktioita samanaikaisesti, jolloin tuloksena on erittäin korkea nopeus ja suoritusteho alennettuun hintaan., Genomin sekvensointi hankkeita, että kesti monta vuotta Sanger menetelmät voivat nyt valmistuu tuntia NGS, vaikka lyhyempi lukea pituudet (numero emäkset, jotka ovat sekvensoitiin kerrallaan) ja vähemmän tarkkuutta.,

Seuraavan sukupolven menetelmiä DNA: n sekvensointi on kolme yleistä vaihetta:

• Kirjasto valmistelu: kirjastot ovat luotu käyttämällä satunnaisia hajanaisuus DNA: ta, jonka jälkeen ligaatio custom-liitintä
• Vahvistus: kirjasto on täydennetty käyttämällä klonaalinen vahvistus-ja PCR-menetelmiä
• Sekvensointi: DNA sekvensoitiin käyttäen useita eri lähestymistapoja

Library preparation

Ensinnäkin, DNA on hajanainen joko entsymaattisesti tai sonication (heräte ultraäänellä) luoda pienempiä säikeitä., Sovittimet (lyhyt, double-stranded kappaletta synteettinen DNA) ovat sitten liitettiin näiden fragmenttien avulla DNA ligase, entsyymi, joka liittyy DNA-säikeet. Sovittimien avulla sekvenssi voi sitoutua toisiaan täydentävään vastineeseen.

– Sovittimet ovat syntetisoitu niin, että toinen pää on ”tahmea”, kun taas toinen on ’tylsä’ (non-cohesive), jotta liittyminen tylppä pää tylppä päättyi DNA: ta. Tämä voisi johtaa mahdolliseen ongelmaan emäsparituksesta molekyylien välillä ja siten dimeerimuodostuksesta., Tämän estämiseksi hyödynnetään DNA: n kemiallista rakennetta, sillä ligaatio tapahtuu 3′-OH-ja 5′ – P-päiden välillä. Poistamalla fosfaatti tahmea pää sovittimeen ja siksi luominen 5′-OH loppuun sen sijaan, DNA ligase ei voi muodostaa silta kahden termini (Kuva 1).,

jotta sekvensointi onnistuu, kirjasto fragmentteja on alueellisesti ryhmitelty PCR siirtomaita tai ’polonies’, koska ne ovat perinteisesti tunnettuja, joka koostuu monta kappaletta tiettyä kirjasto fragmentti. Koska nämä poloniat on kiinnitetty planaarisesti, array ominaisuuksia voidaan manipuloida entsymaattisesti rinnakkain. Tämä menetelmä kirjaston rakentaminen on paljon nopeampi kuin edellinen työvoimaa menettely siirtomaa poiminta ja E., coli Kloonaus käytetään eristää ja vahvistaa DNA Sanger sekvensointi, kuitenkin, tämä on kustannuksella luku pituus fragmentit.

Vahvistusta

Library vahvistus on tehtävä niin, että vastaanotettu signaali sekvensseri on tarpeeksi vahva, voidaan havaita tarkasti. Entsymaattisella vahvistuksella voi esiintyä ilmiöitä, kuten ”biasing” ja ”duplication”, jotka johtavat tiettyjen kirjastojen fragmenttien etuoikeutettuun vahvistukseen. Sen sijaan on olemassa useita erilaisia vahvistusprosesseja, jotka käyttävät PCR: ää luomaan suuria määriä DNA-klustereita.,

Emulsio-PCR

Emulsio, öljy, helmiä, PCR-mix ja kirjaston DNA sekoitetaan muodostamaan emulsio, joka johtaa muodostumista mikro wells (Kuva 2).

jotta sekvensointi prosessi on onnistunut, jokainen mikro olisi oltava yksi helmi, jossa on yksi DNA: ta (noin 15% mikro kaivot ovat tämän koostumuksen). PCR sitten denatures kirjaston fragmentti johtava kaksi erillistä säikeet, joista toinen (Käänteinen strand) kätkee helmi., Hehkutettua DNA: ta täydennetään polymeraasilla helmestä kohti pohjamaalia. Alkuperäinen reverse strand sitten denatures ja vapautuu helmi vain uudelleen hehkuttaa helmi antaa kaksi erillistä osaa. Molemmat vahvistuvat niin, että helmeen kiinnittyy kaksi DNA-juostetta. Tämän jälkeen prosessi toistuu 30-60 syklissä, jotka johtavat DNA-klustereihin. Tämä tekniikka on arvosteltu sen aikaa vievä luonne, koska se vaatii monta vaiheet (forming, ja rikkomatta emulsio, PCR-monistus, rikastus jne) huolimatta sen laaja käyttö monissa NGS-ympäristöissä., Se on myös suhteellisen tehoton, sillä vain noin kaksi kolmasosaa emulsiomikroreaktoreista sisältää itse asiassa yhden helmen. Sen vuoksi tyhjien järjestelmien erottaminen toisistaan edellyttää lisäaskelta, joka johtaa mahdollisempiin epätarkkuuksiin.

Silta PCR

pinta flow cell on tiheästi päällystetty alukkeita, jotka ovat komplementaarisia alukkeita kiinnitetty DNA-kirjasto fragmentteja (Kuva 3). Sen jälkeen DNA kiinnittyy satunnaisesti solun pintaan, jossa se altistuu polymeraasipohjaisen laajennuksen reagensseille., Lisäksi nukleotidien ja entsyymejä, vapaat päät yhden DNA-säikeiden kiinnittyä solun pinnalla kautta täydentäviä pohjamaalit, luoda umpeen rakenteita. Entsyymit vuorovaikuttavat siltojen kanssa siten, että denaturaation tapahtuessa pintaan kiinnittyy lähietäisyydeltä kaksi yksijuosteista DNA-fragmenttia. Tämän prosessin toistuminen johtaa kloonisiin klustereihin, jotka koostuvat paikallisista identtisistä säikeistä. Jotta voidaan optimoida klusterin tiheys, pitoisuudet reagenssit on seurattava hyvin tarkasti, välttää tungosta.,

Sekvensointi

Useita kilpailevia menetelmiä Seuraavan Sukupolven Sekvensointi ovat kehittäneet eri yritykset.

454 Pyrosequencing

Pyrosequencing perustuu ’sequencing by synthesis’ – periaatetta, jossa täydentäviä strand on syntetisoitu läsnä-polymeraasi entsyymi (Kuva 4). Toisin kuin käyttämällä dideoxynucleotides lopettaa ketjun vahvistus (kuten Sanger-sekvensointi), pyrosequencing sen sijaan havaitsee, release pyrofosfaatti, kun nukleotideja lisätään DNA-ketjun., Se käyttää aluksi emulsion PCR-tekniikkaa sekvensointiin tarvittavien polonien muodostamiseen ja poistaa täydentävän juosteen. Seuraavaksi ssDNA sekvensointi pohjamaali hybridisoituu loppuun strand (primer-sitova alue), sitten neljä eri dNTPs ovat sitten peräkkäin tehty virrata sisään ja ulos kaivoja yli polonies. Kun oikea dNTP on entsymaattisesti sisällytetty juosteeseen, se aiheuttaa pyrofosfaatin vapautumista. ATP-sulfurylaasin ja adenosiinin läsnä ollessa pyrofosfaatti muuttuu ATP: ksi., Tämä ATP-molekyyliä käytetään luciferase-katalysoi muuntaminen luciferin että oxyluciferin, joka tuottaa valoa, joka voidaan havaita kameran kanssa. Suhteellinen valon voimakkuus on verrannollinen pohjan lisätty (eli huippu kahdesti intensiteetti ilmaisee kaksi samanlaista emäkset on lisätty peräkkäin).,

Pyrosequencing kehittämä 454 Life Sciences, oli yksi varhainen onnistumisia Seuraavan sukupolven sekvensointi; todellakin, 454 Life Sciences tuottaa ensimmäinen kaupallisesti saatavilla Seuraavan sukupolven sekvensseri. Kuitenkin, menetelmä oli varjoon muita teknologioita, ja vuonna 2013, uudet omistajat Roche ilmoitti sulkevansa 454 Life Sciences ja lopettamisen 454 pyrosequencing alustan.,

Ion torrent puolijohde sekvensointi

Ion torrent sekvensointi käyttää ”sequencing by synthesis” – lähestymistapaa, jossa uuden DNA-säikeen, täydentäviä kohteeseen strand, syntetisoidaan yksi pohja kerrallaan. Puolijohdesiru havaitsee DNA-polymeroinnin aikana tuotetut vetyionit (kuva 5).

polonimuodostuksen jälkeen emulsio PCR: n avulla DNA-kirjaston fragmentti tulvii peräkkäin jokaisella nukleosiditrifosfaatilla (dntp), kuten pyrosekvencingissä. DNTP liitetään uuteen lohkoon, jos se täydentää kohdelohkon nukleotidia., Joka kerta, kun nukleotidia lisätään onnistuneesti, vapautuu vetyioni, joka havaitaan sekvensserin pH-sensorilla. Kuten pyrosekvenssimenetelmässä, jos samaan nukleotidiin lisätään useampi kuin yksi, pH/signaalin voimakkuuden muutos on vastaavasti suurempi.

Ion torrent sekvensointi on ensimmäinen kaupallinen tekniikka ei käytä fluoresenssi ja kamera skannaus; se on siis nopeampi ja halvempi kuin monet muut menetelmät., Valitettavasti, se voi olla vaikea luetella määrä identtisiä emäksiä lisätään peräkkäin. Esimerkiksi, se voi olla vaikea erottaa pH-muutos homorepeat pituus 9 yksi pituus 10, jolloin se on vaikea purkaa toistuvat sekvenssit.

Sekvensointi, jonka sitomiseen (Kiinteä)

Kiinteä on entsymaattinen menetelmä sekvensointi, joka käyttää DNA ligase, entsyymi, jota käytetään laajalti bioteknologian sen kyky mitä double-stranded DNA-säikeet (Kuva 6)., Emulsio-PCR käytetään lamaannuttamiseen/voimistaa ssDNA primer-sitova alue (tunnetaan nimellä sovitin), joka on ollut konjugoitu kohdesekvenssin (eli sekvenssi, joka on sekvensoitu) on helmi. Nämä helmet ovat sitten talletetaan kiinni lasin pintaan − korkea tiheys helmiä voidaan saavuttaa, mikä puolestaan lisää suoritusteho tekniikka.

Kun helmi laskeuma on tapahtunut, pohjamaali, jonka pituus on N on hybridisoitiin sovittimeen, sitten helmet ovat alttiina kirjasto 8-mer luotaimet, jotka ovat eri fluoresoiva väriaine 5′ pää ja hydroksyyliryhmä 3′ loppuun., Tukikohdat 1 ja 2 ovat täydentäviä nukleotidien sekvensoida, kun taas emäkset 3-5 ovat rappeutua ja emäkset 6-8 ovat inosiini emäkset. Vain täydentävä luotain hybridisoituu kohdejaksoon primerin vieressä. DNA-ligaasia käytetään sitten 8-mer-luotaimen liittämiseen pohjamaaliin. Emästen 5 ja 6 välinen fosforotioaattisidos mahdollistaa fluoresoivan väriaineen pilkkoutumisen fragmentista hopeaioneilla., Tämä pilkkominen mahdollistaa fluoresenssi voidaan mitata (neljä eri fluoresoivia väriaineita käytetään, jotka kaikki ovat eri päästöjen spectra) ja tuottaa myös 5′-fosfaatti-ryhmä, joka voi suorittaa edelleen sitomiseen. Kun ensimmäisen kierroksen sekvensointi on valmis, tiedostotunnistetta tuote on sulanut pois ja sitten toisen kierroksen sekvensointi on suorittaa pohjamaalilla, jonka pituus on N−1. Useat jaksotuskierrokset lyhyemmillä pohjamaaleilla joka kerta (N−2, N−3 jne.) ja fluoresenssin mittaaminen varmistavat, että kohde on sekvensoitu.,

Koska kaksi-pohja sekvensointi menetelmä (koska jokainen pohja on tehokkaasti sekvensoitiin kahdesti), Vankka tekniikka on erittäin tarkka (at 99.999% kuudennen pohjamaali, se on tarkin toisen sukupolven alustoilla) ja myös edullinen. Se voi suorittaa yhden ajon 7 päivässä ja tuona aikana voi tuottaa 30 Gt dataa. Valitettavasti sen suurin haitta on, että lukea pituudet ovat lyhyitä, joten se ei sovellu monia sovelluksia.,

Palautuva terminator sekvensoinnin (Illumina)

Palautuva terminator sekvensointi eroaa perinteinen Sanger-menetelmän sijaan päättämisestä primer-tiedostotunnistetta peruuttamattomasti käyttäen dideoxynucleotide, muokattu nukleotideja käytetään palautuvia irtisanominen. Vaikka monia muita tekniikoita käyttää emulsio-PCR monistamaan DNA-kirjaston katkelmia, palautuva irtisanominen käyttää sillan PCR, tehokkuuden parantaminen prosessin tässä vaiheessa.,

Palautuva terminaattoreita voidaan jakaa kahteen ryhmään: 3′-O-tukossa palautuva terminaattoreita ja 3′-vapautetuksi palautuva terminaattoreita.

3′-O-tukossa palautuva terminaattoreita

mekanismi käyttää sequencing by synthesis approach, kasvavaan pohjamaali asteittain. Ensinnäkin alkulukujen ja mallien sekvensointi on kiinteä tuki. Tuki on alttiina jokainen neljästä DNA emäkset, jotka ovat eri fluorophore kiinnitetty (ja typpipitoiset base) lisäksi 3′-O-azidomethyl ryhmä (Kuva 7).,

Vain oikea pohja anneals kohde ja on sittemmin liitettiin pohjamaali. Kiinteä tuki on sitten kuvaamisen ja nukleotidit, joita ei ole sisällytetty pestään pois ja loisteputki haara on halkaistut käyttäen TCEP (tris(2-carboxyethyl)phosphine). TCEP myös poistaa 3′-O-azidomethyl ryhmä, elvyttäminen 3′-OH, ja sykli voidaan toistaa (Kuva 8) .,

3′-vapautetuksi palautuva terminaattoreita

palautuva irtisanominen ryhmä 3′-vapautetuksi palautuva terminaattoreita liittyy sekä pohja-ja fluoresenssi-ryhmä, joka toimii nyt osana irtisanominen ryhmä sekä toimittaja. Tämä menetelmä eroaa 3′-O-tukossa palautuva terminaattoreita menetelmä kolmella tavalla: ensinnäkin, 3′-asentoon ei estetty (eli, pohja on vapaa 3′-OH); että fluorophore on sama kaikille neljä emäkset; ja jokainen muutettu pohja on virrannut vuonna peräkkäin eikä samanaikaisesti.

näiden tekniikoiden suurin haitta on niiden huono lukupituus, joka voi johtua jommastakummasta kahdesta ilmiöstä. Estämiseksi sisällyttäminen kahden nukleotidin yksi vaihe, lohko on otettu käyttöön, kuitenkin, jos ei estää lisäksi heikon synteesi, osa voi tulla ulos vaiheessa luoda melua, joka rajoittaa lukea pituus. Melua voi syntyä myös, jos fluorofori on tuloksetta kiinni tai poistettu., Nämä ongelmat ovat yleisiä muissa sekvensointimenetelmissä ja ovat tärkeimmät lukuaikaa rajoittavat tekijät.

tämän tekniikan uranuurtajana toimi Illumina HiSeq-ja MiSeq-alustoineen. HiSeq on toisen sukupolven sekvenssereistä Halvin, jonka hinta on 0,02 dollaria miljoonalta tukikohdalta. Sillä on myös suuri datateho 600 Gb / juoksu, joka kestää noin 8 päivää loppuun.

Kolmannen sukupolven sekvensointi

uusi kohortti tekniikkaa on sittemmin kehitetty käyttäen yhden molekyylin sekvensointi ja yhden reaaliaikainen sekvensointi, poistamalla tarve klonaalinen vahvistusta., Tämä vähentää aiheuttamat virheet PCR, kirjasto yksinkertaistaa valmistelua ja, mikä tärkeintä, antaa paljon suurempi lukenut pituus käyttämällä korkeampi suoritusteho alustoilla. Esimerkkejä ovat muun muassa Tyynenmeren Biotieteiden’ alusta, joka käyttää SMRT (yhden molekyylin todellinen aika) sekvensointi antaa lukea pituudet noin tuhat emäkset ja Helicos Biosciences, joka hyödyntää yhden molekyylin sekvensointi, ja siksi ei vaadi vahvistusta ennen sekvensointi. Oxford Nano-Teknologiat kehittyvät tällä hetkellä pii-pohjainen nanohuokosiin, jotka joutuvat nykyisen että muutoksia DNA kulkee huokosten., Tämän on ennakoitu olevan suurikapasiteettisten nopea menetelmä DNA: n sekvensointi, vaikka ongelmia, kuten hidastaa kuljetus kautta pore on ensin käsiteltävä.

Sekvensointi epigeneettisiä muutoksia

Aivan kuten Seuraavan sukupolven sekvensointi käytössä genomien sekvensointi laajamittaisesti, se on tullut selväksi viime aikoina, että geneettinen koodi ei sisällä kaikkia tarvittavia tietoja organismeja. Myös epigeneettiset muutokset DNA-emäksiin, erityisesti 5-metyylisytosiiniin, välittävät tärkeää tietoa.,

toisen sukupolven sekvensointi-alustoille riippuu, kuten Sanger sekvensointi, on PCR ja siksi ei järjestyksessä muunnetun DNA: n emäksiä. Itse asiassa, molemmat 5-methylcytosine ja 5-hydroxymethylcytosine kohdellaan kuin sytosiini, jonka osallistuvien entsyymien PCR; siksi, epigeneettiset tiedot on kadonnut aikana sekvensointi.,

Adrenaliinin sekvensointi

Adrenaliinin sekvensointi hyödyntää ero reaktiivisuus tymiini ja 5-methylcytosine osalta bisulfite: tymiini on deaminated, jonka adrenaliinin muodostaa urasiili (joka lukee T kun sekvensoitiin), ottaa huomioon, että 5-methylcytosine on unreactive (eli lukee kuin C). Jos kaksi sekvensointi toimii tehdään rinnakkain, yksi adrenaliinin hoito ja yksi ilman, erot lähdöt kaksi toimii osoittavat, denaturoitu cytosines alkuperäisessä järjestyksessä., Tätä tekniikkaa voidaan käyttää myös dsDNA, koska hoidon jälkeen adrenaliinin, säikeet eivät ole enää toisiaan täydentäviä ja niitä voidaan käsitellä kuten ssDNA.

5-Hydroxymethylcytosine, toinen tärkeä epigeneettisiä muutoksia, reagoi adrenaliinin muodostaa sytosiini-5-methylsulfonate (joka lukee kuin C, kun sekvensoitiin). Tämä mutkistaa asioita jonkin verran, ja tarkoittaa, että adrenaliinin sekvensointi ei voi käyttää kuin todellinen indikaattori vaikka itse.,

Oksidatiivisen adrenaliinin sekvensointi

Oksidatiivisen adrenaliinin sekvensointi lisää kemiallinen hapetus vaihe, joka muuntaa 5-hydroxymethylcytosine 5-formylcytosine käyttäen kaliumia perruthenate, KRuO4, ennen kuin adrenaliinin hoito. 5-Formyylisytosiini epämuodostuu ja deaminoituu urasiiliksi bisulfiittihoidolla. Nyt, kolme erillistä sekvensointi toimii ovat tarpeen erottaa, sytosiini, 5-methylcytosine ja 5-hydroxymethylcytosine (ks. Kuva 9).,

Hakemukset Seuraavan sukupolven sekvensointi

Seuraavan sukupolven sekvensointi on mahdollistanut tutkijat voivat kerätä valtavia määriä genomien sekvensointi tietoja., Tämä tekniikka on lukuisia sovelluksia, kuten: diagnosoinnissa ja ymmärrystä monimutkaisia sairauksia; koko-genomin sekvensointi; analyysi epigeneettiset muutokset; mitokondrioiden sekvensointi; transcriptome sekvensointi − ymmärtää, miten muuttaa ilme geneettisiä variantteja vaikuttaa organismi, ja exome sekvensointi − mutaatioita exome arvellaan sisältävät jopa 90% mutaatioita ihmisen genomin, joka johtaa taudin., DNA-tekniikoita on käytetty tunnistaa ja eristää geenejä vastuussa tiettyjen sairauksien, ja antaa oikea kopiota viallisen geenin, joka tunnetaan nimellä ”geeniterapian”.

suuri tarkennusalue geeniterapia on syöpä – yksi mahdollinen tapa olisi ottaa käyttöön antisense-RNA: ta (joka nimenomaan estää synteesi kohdennettuja proteiinia) ja onkogeeni, joka laukeaa muodostaa tumorous soluja. Toinen menetelmä on nimeltään ”suicide gene therapy”, joka tuo geenejä tappamaan syöpäsoluja valikoivasti., Toksisten proteiinien ja entsyymien geneettisiä koodeja tunnetaan paljon, ja näiden geenien kulkeutuminen kasvainsoluihin johtaisi solukuolemaan. Tämän menetelmän vaikeus on varmistaa erittäin tarkka toimitusjärjestelmä terveiden solujen tappamisen estämiseksi.
Nämä menetelmät ovat mahdollisia sekvensointi analysoida kasvain genomit, jolloin lääketieteen asiantuntijat räätälöidä kemoterapiaa ja muita syövän hoitoja tehokkaammin niiden potilaiden ainutlaatuinen geneettinen koostumus, mullistaa diagnostisia vaiheissa henkilökohtainen lääketiede.,

kun DNA-sekvensoinnin kustannukset laskevat, se yleistyy, mikä tuo mukanaan useita kysymyksiä. Sekvensointi tuottaa valtavasti dataa, ja Datan käsittelyyn ja tallentamiseen liittyy monia laskennallisia haasteita. On myös eettisiä kysymyksiä, kuten yksilön DNA: n omistaminen, kun DNA on sekvensoitu. DNA sekvensointi tietoja on säilytettävä turvallisesti, koska pelätään, että vakuutus ryhmiä, kiinnitys välittäjät ja työnantajat voivat käyttää näitä tietoja muokata vakuutus lainausmerkit tai erottaa ehdokkaat., Sekvensointi voi myös auttaa selvittämään, onko yksilöllä on lisääntynyt riski tietyn sairauden, mutta onko potilas on ilmoitettu, tai jos on parannuskeinoa tauti on toinen kysymys kokonaan.

Ahmadian, A.; Svahn, H.; massiivisesti rinnakkain. Sekvensointi alustoja käyttäen Lab siru teknologioita. Lab Chip, 11, 2653 − 2655 (2011).

Balasubramanian, S.; nukleiinihappojen sekvensointi kemiasta lääketieteeseen. Kem. Kommun. 47, 7281 − 7286 (2011).

Mardis, E.; seuraavan sukupolven DNA-Sekvensointimenetelmät. Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 9, 387 − 402 (2008).

Mardis, E.,; Seuraavan sukupolven DNA-Sekvensointialustat. Annu. Rev. Anal. Kem. 6, 287-303 (2013).

Shendure, J.; Ji, H.; Seuraavan Sukupolven DNA-Sekvensointi. Nat. Bioteknologia. 26, 10 1135-1144 (2008).

Katso myös

– Meidän ilmainen online-nukleiinihapot Kirja sisältää tietoa kaikilla nukleiinihapot kemia ja biologia.