absztrakt

az E. coli DNS-ligáza 75 000 molekulatömegű polipeptid. A hasonló T4-indukált enzim valamivel kisebb (63 000-68 000). Mindkét enzim katalizálja a szomszédos 5′-foszforil és 3′-hidroxil-csoportok közötti foszfodiészter-kötések szintézisét a DPN (E. coli) vagy ATP (T4) pirofoszfát-kötésének hasadásával párosulva., A két enzim által katalizált foszfodiészter kötésszintézis ezen diszkrét lépések sorozatában fordul elő, és két kovalens intermedier (ábra. 1). A reakciókatalizált E. coli ligáz dinamikus egyensúlyi kinetikai analízise támogatja ezt a mechanizmust, továbbá azt is bizonyítja, hogy az enzim-adenilát és a DNS-adenilát kinetikusan jelentős intermedier a foszfodiészter kötésszintézis közvetlen útján.

a DNS-ligáz szerkezeti génjében mutációval rendelkező E. coli törzs, amely abnormálisan termolabil enzim szintézisét eredményezi, 42°C-on invinable., Bár 30°C-on képes növekedni, a mutáns ezen a hőmérsékleten még mindig hibás, mivel képes az ultraibolya besugárzás és alkiláló szerek által okozott DNS-károsodás helyreállítására. 42°C-on az összes újonnan replikált DNS rövid 10-es “Okazaki fragmensek” formájában van, ami azt jelzi, hogy a mutáns ilyen körülmények között való túlélésének elmulasztásának oka az, hogy képtelen fenntartani az E. coli kromoszóma szakaszos szintéziséhez elengedhetetlen ligációs lépést. A DNS-ligáz ezért alapvető enzim, amely az E. coli normál DNS-replikációjához és javításához szükséges., A tisztított DNS-ligázok hasznosnak bizonyultak a rekombináns DNS-molekulák in vitro kialakításában.