kulcsszavak

Papanicolaou kenetek, Trichomonas vaginalis, mikroszkópia

Bevezetés

Trichomonas vaginalis egy flagellált protozoán, amely trichomonaisist okoz, és világszerte a leginkább gyógyítható szexuális úton terjedő betegség . A humán papillomavírus mellett a trichomoniasis a leggyakoribb szexuális úton terjedő fertőzés az Egyesült Államokbanállamok ma. Mind a nők, mind a férfiak körében a T., vaginalis humán immunimmundeficiencia megszerzése és átvitel kimutatták, több tanulmány . A nőknél a trichomoniasis szerepet játszhat a cervicalis neoplasia kialakulásában, a posztoperatív fertőzésekben és a kedvezőtlen terhességi kimenetelben, valamint az atipikus kismedencei gyulladásbanbetegség és meddőség. A férfiaknál a trichomoniasis a nongonoccocaluretritis egyik oka, valamint hozzájárul a férfi faktor meddőségéhez . A leggyakoribb módszera diagnózis az éjszakai tenyészeten keresztül történik, 75-95% érzékenységi tartományban ., Olyan módszereket is alkalmaztak, mint például a gyors antigénvizsgálat és a transzkripció-mediált amplifikáció, és azt mondják, hogy nagyobb érzékenységgel rendelkeznek, de nem széles körben használják . A T. vaginalis jelenlétea PCR-vel is diagnosztizálható, a GENBANK/L23861 specifikus primerekkel. A Pap kenetegy rutin szűrővizsgálat, amelyet a méhnyak rendellenességeinek és a méhnyálkahártya precancerousdysplasticus változásainak kimutatására használnak . Azt is érzékeli, bizonyos vírusos, bakteriális, fungalinfections a méhnyak és a hüvely ., Epidemiológiai és kísérleti bizonyítékok is vannak arra vonatkozóan, hogy a Pap-kenetek jótékony hatással vannak a cervicalcancer-hez kapcsolódó kockázati tényezők, például a humán papilloma vírus kimutatására . A vizsgálat célja az volt, hogy meghatározzák a Pap-kenet alkalmasságát a Trichomonas vaginalis cervicalis és vaginális mintákban történő kimutatásában.,

Anyagok, Módszerek

Három száz nyaki, illetve hüvelyi példányok pamut, gyapjú szólt applikátorok, amelyek sentfor mikroszkópia voltak egyszerre vizsgálja a hagyományos Papanikolau módszer,a kultúra, valamint a PCR-a jelenléte Trichomonas vaginalis egyes kórházak Dél andWestern Nigéria.

Papanicolaou method

minden példányt tiszta zsírmentes csúszdára kentek, és éter-alkoholban rögzítették 30 percig., A mintákat ezután a Papanicolaou-módszerrel festették a következők szerint: Harris ‘ shaematoxylin ecetsav nélkül 5 percig, csapvízzel öblítve, 1% acidalkoholban 30 másodpercig differenciálva, majd Scott vízében 2 percig átitatva. A keneteket 95% – os alkoholra vitték, és 2 percig OG6-ban festették, 95% – os alkohollal öblítették le,majd 2 percig EA 35-ben festették. A keneteket ezután az abszolút alkohol, a xilol és a szerelt inDPX két változására vitték., A foltos keneteket a Trichomonas vaginalis és perinuclearis halo jelenlétében alacsony és nagy teljesítményű fénymikroszkóp alatt vizsgálták.

a nedves készítmény vizsgálata

minden gyapotszál hegyű applikátort ezt követően egy körülbelül 2 ml-es sóoldatot tartalmazó kémcsőben öblítettek le. A tartalmat egy tiszta üvegcsúszdára öntötték, majd a fénymikroszkóp alatt megvizsgálták egy gyorsan mozgó organizmus jelenlétét.

T. vaginalis tenyészete

táptalaj és tenyészet előkészítése

Kupferberg Trichomonas táptalaj feloldásával 23.,5 g KupferbergTrichomonas bázis (Quelab, Kanada) 950 ml desztillált vízben hő segítségével,autoklávban sterilizálva 15 percig 15 Ib nyomáson (121°C), majd lehűtjük. 50 ml heatinaktivált (55-60°C) szarvasmarha szérumot adtak hozzá. Antibiotikumokat (penicillin G és sztreptomicin) ésgombaellenes (amfotericin B) adtak a keverékhez, és 4ºc-on tárolták. Körülbelül 15 ml themediumot egy tenyészcsőbe helyeztünk, majd 37°C-ra melegítettük 15 percig. A nyaki és hüvelyváladékokat a közegbe helyezték, majd 7 napig 37 ° C-on inkubálták, majd mikroszkóposan megvizsgálták őket., A táptalajt kétszer mossuk steril foszfát pufferelt sóoldatban (PBS) pH7.2-ben, majd DNS-extrakciónak vetjük alá.

DNS extrakció, primerek és PCR

a tenyészeteket kétszer mossuk steril foszfát pufferelt sóoldatban pH7.2-n, és 400 µl t/E pufferben szuszpendáljuk. A DNS-extrakciót SDS-sel és K proteinázzal, majd byCTAB/NaCl-lel végezték. A DNS jelenlétét a Pcramplifikáció előtt elektroforézissel igazolták. Alapozók alapján T., a vaginalis DNS-t egy 300 bp-os géndarab (TIB MOLBIOL, Németország) felerősítésére használták, míg a PCR-reakciót az automatedthermal cycler (Eppendorf master cycler gradiens) segítségével hajtották végre.

eredmények

1.táblázat Pap kenet, nedves készítmény és PCR

a Pap technikával vizsgált 300 példányból 24 (8%) T. vaginalis perinukleáris halo-szuggesztiveof, míg az organizmusokat 15-ben (5%) látták. A példány 30 (10%) mind a T. vaginalis, mind a perinukleáris halo volt., A fénymikroszkóp alatt nedves készítményekben a minták 36(12%) T. vaginalis volt.

2. Táblázat Százalékos érzékenység képest kultúra PCR

Amikor képest pozitív eredmények a kulturális PCR, nedves készítmények volt a highestsensitivity a 81.58%, ezt követi 65.77% – a diagnózis alapján perinuclear halo T. vaginalis. A perinukleáris halo-n alapuló feltételezett diagnózis önmagában 52, 63% volt, míg a Pap-kenetben lévő organizmusok azonosításán alapuló diagnózis 42 volt.,11%

Vita

a Papanicolaou a legjobb festési módszer a citológiában, mert segít hatékonyan megkülönböztetnimalignáns sejtek a nem rosszindulatú sejtektől. A citoplazmát és annak tartalmát is megfesti . Az acidofil anyagok bazofil anyagoktól való megkülönböztethetősége, valamint a nem sejtes anyagok, például a fibrin, a kristályok és a pigmentek előállításának képessége a citológia lényeges foltjává teszi . T. vaginalis, a trichomoniasis okozója a leggyakoribbtartós szexuális úton terjedő szervezet világszerte ., Parazitálja mind a férfiakat, mind a nőket.ahol néha tünetmentes a fertőzés korai szakaszában. A T. vaginalis fertőzés szerepet játszik a cervicalis neoplasia, a posztoperatív fertőzések és a kontraszt terhesség kialakulásában, valamint az atipikus kismedencei gyulladásos betegségek és meddőség kialakulásában .Epidemiológiai és kísérleti bizonyítékok is vannak arra, hogy a Pap-kenetek jótékony hatással vannak a méhnyakrákkal kapcsolatos kockázati tényezők, például a humanpapilloma vírus . A trichomoniasis diagnózisának számos módja létezik., Van a legkönnyebbmódszer, amely magában foglalja a mikroszkóp alatt végzett nedves készítmény vizsgálatát, ahol aszervezetek minden irányban gyorsan mozognak. Más módszerek közé tartozik az éjszakai tenyészet, a gyors antigénvizsgálat ,valamint a transzkripciós mediált amplifikáció és a PCR.A Pap-kenet egy rutin szűrővizsgálat, amelyet a nyaki rendellenességek kimutatására ésprecancerus dysplasticus változások a méhnyálkahártya . Azt is érzékeli, bizonyos vírusos, bakteriális, gombás fertőzések, a méhnyak és a hüvely ., Ebben a kísérletben megvizsgálták a vizes és vaginális kenetek, valamint a Papanicolaou festett kenetek nedves készítményeit, és összehasonlították a PCR-ből 7 napos tenyésztés után nyert eredményekkel. A perinukleáris halo jelenléte a hámbana sejteket a T. vaginalis feltételezett diagnózisaként használták. A Pap kenetek nem jobbak a nedveseknélkészítmények a T. vaginalis kimutatásában, amint azt az 1.és 2. táblázat mutatja. A kultúra igen érzékeny módszer a T. vaginalis kimutatására, de drága és időigényes. Ez ki van zárva, hogy míg T., a vaginalis-t nyaki és vaginális Pap-kenetekben kell jelenteni, ezek hiányaa Mears nem jelzi a szervezet abszolút hiányát a betegben.