European Journal of Experimental Biology (Italiano)
Parole chiave
Papanicolaou strisci, Trichomonas vaginalis, microscopia
Introduzione
Trichomonas vaginalis è un protozoo flagellato che causa Trichomonaisis ed è la malattia sessualmente trasmissibile più comune in tutto il mondo . Oltre a humanpapillomavirus, tricomoniasi è l’infezione sessualmente trasmessa più comune negli Stati Uniti oggi. Tra le donne e gli uomini, l’associazione di T., vaginalis con umanol’acquisizione e la trasmissione dell’immunodeficienza sono state dimostrate in diversi studi . Nelle donne, la tricomoniasi può svolgere un ruolo nello sviluppo di neoplasia cervicale, infezioni postoperatorie e esiti avversi della gravidanza e come fattore di malattia infiammatoria pelvica atipica e infertilità. Negli uomini, la tricomoniasi è emersa come causa di nongonoccocaluretrite e come contributo alla sterilità del fattore maschile . Il metodo più comune di diagnosi è attraverso la coltura notturna con un intervallo di sensibilità del 75-95% ., Sono stati utilizzati anche metodi, come il test rapido dell’antigene e l’amplificazione mediata dalla trascrizione, che si dice abbiano una maggiore sensibilità, ma non sono in uso diffuso . La presenza di T. vaginalis puòanche essere diagnosticata mediante PCR, utilizzando primer specifici per GENBANK / L23861 . Il Pap test èun test di screening di routine utilizzato per la rilevazione di anomalie cervicali e cambiamenti precancerosidisplastici della cervice uterina . Rileva anche alcune infezioni virali, batteriche e fungine della cervice e della vagina ., C’è anche evidenza epidemiologica e sperimentale che Pap strisci sono utili nel rilevare infezioni che sono fattori di rischio associati con cervicalcancer, come il virus del papilloma umano . Lo scopo di questo studio era determinare l’adattabilità del Pap test nella rilevazione di Trichomonas vaginalis in campioni cervicali e vaginali.,
Materiali e metodi
Trecento campioni cervicali e vaginali in applicatori con punta di cotone idrofilo che sono stati inviati per la microscopia sono stati esaminati simultaneamente con il metodo convenzionale Papanicolaou,la cultura e la PCR per la presenza di Trichomonas vaginalis in alcuni ospedali della Nigeria meridionale e occidentale.
Metodo Papanicolaou
Ogni campione è stato spalmato su un vetrino privo di grasso pulito e fissato in etere-alcool per 30 minuti., I campioni sono stati poi colorati con il metodo Papanicolaou come segue: L’ematossilina di Harris senza acido acetico per 5 minuti, sciacquati in acqua di rubinetto e differenziati in 1% acidalcoholfor 30 secondi e azzurrati nell’acqua di Scott per 2 minuti. Gli strisci sono stati portati al 95% di alcol e macchiati in OG6 per 2 minuti, sciacquati in alcool al 95% e macchiati in EA 35 per 2 minuti. Gli strisci sono stati quindi portati a due cambi di alcol assoluto, xilene e inDPX montato., Gli strisci macchiati sono stati esaminati al microscopio ottico a bassa e alta potenzaobiettivi per la presenza di Trichomonas vaginalis e alone perinucleare.
Esame della preparazione umida
Ogni applicatore con punta in cotone idrofilo è stato successivamente risciacquato in una provetta contenente circa 2 ml di soluzione salina normale. Il contenuto è stato versato su un vetrino pulito ed esaminato sotto la lucemicroscopio per la presenza di organismi in rapido movimento.
Cultura di T. vaginalis
Preparazione del terreno di coltura e della cultura
Il terreno di Kupferberg Trichomonas è stato preparato sciogliendo 23.,5g della base KupferbergTrichomonas (QUELAB, Canada) in 950 ml di acqua distillata con l’aiuto del calore,sterilizzato in autoclave per 15 min a 15 Ib pressione (121°C) e raffreddato. sono stati aggiunti 50 ml di siero bovino heatinactivated (55-60°C). Antibiotici (penicillina G e streptomicina) eantifungal (Amfotericina B) sono stati aggiunti alla miscela e conservati a 4ºC. Circa 15 ml di themedium è stato messo in un tubo di coltura e riscaldato a 37°C per 15 min. I tamponi cervicali e vaginali sono stati posti nel mezzo e incubati a 37ºC per 7 giorni dopo di che sono stati esaminati al microscopio., Il mezzo è stato lavato due volte in soluzione salina tampone fosfato sterile (PBS) pH7.2 e sottoposto all’estrazione del DNA.
Estrazione del DNA, primer e PCR
Le colture sono state lavate due volte in soluzione salina tampone fosfato sterile a pH7.2 e sospese in tampone 400µl T / E. L’estrazione del DNA è stata eseguita utilizzando SDS e proteinasi K seguita da CTAB / NaCl. La presenza di DNA è stata confermata mediante elettroforesi prima della pcramplificazione. Primer basati su T., il DNA di vaginalis è stato usato per amplificare un pezzo di gene da 300 bp (TIB MOLBIOL, Germania) mentre la reazione PCR è stata eseguita utilizzando il ciclatore termico automatico (gradiente di Eppendorf master cycler).
Risultati
la Tabella 1, Pap test, preparazione umido e PCR
Di 300 esemplari esaminati dal Pap tecnica, 24 (8%) aveva perinucleare halo suggestiveof T. vaginalis, mentre gli organismi sono stati visti in 15 (5%) di loro. 30 (10%) degli specimentiaveva sia T. vaginalis che alone perinucleare., Nelle preparazioni umide al microscopio ottico, 36(12%) dei campioni avevano T. vaginalis.
Tabella 2 Sensibilità percentuale rispetto alla coltura e alla PCR
Rispetto ai risultati positivi della coltura e della PCR, i preparati umidi avevano la più altasensibilità dell ‘ 81,58% seguita dal 65,77% della diagnosi basata su aureola perinucleare e T. vaginalis. La diagnosi presuntiva basata sull’alone perinucleare da sola era del 52,63% mentre la diagnosi basata sull’identificazione di organismi nel Pap test era del 42.,11%
Discussione
Papanicolaou è il miglior metodo di colorazione in citologia, perché aiuta a differenziare efficacementecellule maligne da cellule non maligne. Macchia anche il citoplasma e il suo contenuto . La sua capacità di differenziare i materiali acidofili dai materiali basofili e la sua capacità di contenere sostanze non cellulari come fibrina, cristalli e pigmenti, lo rendono una macchia essenziale in citologia . T. vaginalis, l’organismo causale per la tricomoniasi è il più comuneorganismo sessualmente trasmesso in tutto il mondo ., Parassita sia i maschi che le femminedove a volte è asintomatico nelle prime fasi dell’infezione. T. vaginalis infezione issaid per svolgere un ruolo nello sviluppo di neoplasia cervicale, infezioni postoperatorie, e risultati adversepregnancy e come un fattore nella malattia infiammatoria pelvica atipica e infertilità .Esistono anche prove epidemiologiche e sperimentali che i Pap test sono utili per rilevare infezioni che sono fattori di rischio associati al cancro cervicale, come il virus del papilloma umano . Esistono diversi metodi di diagnosi della tricomoniasi., C’è il easiestmethod che comprende l’esame di una preparazione bagnata sotto il microscopio in cui i theorganisms sono visti muoversi rapidamente in tutte le direzioni. Altri metodi includono la coltura durante la notte, il test rapido dell’antigene e l’amplificazione mediata dalla trascrizione e dalla PCR .Pap test è un test di screening di routine utilizzato per la rilevazione di anomalie cervicali ecambiamenti displastici precancerosi della cervice uterina . Rileva anche alcune infezioni virali, batteriche e fungine della cervice e della vagina ., In questo esperimento, sono state esaminate e confrontate le preparazioni bagnate di strisci cervicali e vaginali e di strisci macchiati di Papanicolaou con i risultati ottenuti dalla PCR dopo 7 giorni di coltura. La presenza di alone perinucleare nell’epiteliale cellule sono state utilizzate come diagnosi presuntiva per T. vaginalis. Pap strisci non sono superiori a bagnatipreparati nel rilevamento di T. vaginalis come mostrato nelle tabelle 1 e 2. La cultura è un metodo moltosensibile per rilevare T. vaginalis ma è costoso e richiede tempo. Si conclude che mentre T., vaginalis deve essere riportato in Pap strisci cervicali e vaginali, la sua assenza in questile orecchie non sono un’indicazione per l’assenza assoluta dell’organismo nel paziente.
