Il sequenziamento del DNA è un metodo di laboratorio utilizzato per determinare la sequenza di una DNAmolecola. Il metodo è stato sviluppato da Frederick Sanger nel 1975, che è stato più tardi premiato con il premio Nobel per la chimica nel 1980 per i suoi contributi tounderstanding sequenze di DNA. Di conseguenza, viene spesso indicato come sequenziamento Sanger.

Nel sequenziamento Sanger, il DNA da sequencedserves come modello per la sintesi del DNA. Un primer DNA è progettato per essere unpunto di partenza per la sintesi del DNA sul filamento di DNA da sequenziare., Vengono eseguite quattro reazioni di sintesi del DNA individuali. Le quattro reazioni includononormali A, G, C e T deossinucleotide trifosfati (dNTPs), e ciascuno containsa basso livello di uno dei quattro dideossinucleotide trifosfati (ddNTPs): ddATP,ddGTP, ddCTP, o ddTTP. Le quattro reazioni possono essere denominate A, G,C e T, in base a quale dei quattro DDNTP è stato incluso. Quando un ddNTP èincorporato in una catena di nucleotidi, la sintesi termina. Questo perché la molecola ddNTP manca di un gruppo idrossilico 3′, che è necessario per formare un collegamento con il prossimo nucleotide nella catena., Poiché i DDNTP sono randomlyincorporated, sintesi termina in molte posizioni diverse per eachreaction.

Dopo la sintesi, i prodotti delle reazioni A, G, C e T vengono caricati individualmente in quattro corsie di un singolo gel e separati utilizzando la gelelettroforesi, un metodo che separa i frammenti di DNA dalle loro dimensioni. Vengono rilevate le bande del gel e quindi la sequenza viene letta dal fondo del gel verso l’alto, comprese le bande in tutte e quattro le corsie., Ad esempio, se la banda più bassa su tutte e quattro le corsie appare nella corsia di reazione A, allora il primo nucleotide nella sequenza è A. Quindi se la banda successiva dal basso verso l’alto appare nella corsia T, il secondo nucleotide nella sequenza è T, e così via.A causa dell’uso di dideossinucleotidi nelle reazioni, il sequenziamento di Sanger èanche chiamato sequenziamento “dideossi”.