DNAシークエンシングは、DNAmoleculeの配列を決定するために使用される実験室の方法です。 この方法は1975年にフレデリック-サンガーによって開発され、1980年にDNA配列の解析への貢献によってノーベル化学賞を受賞した。 そのため、しばしばサンガーシークエンシングと呼ばれる。

サンガー配列決定では、配列決定されるDNAはDNA合成の鋳型として役立つ。 DNAプライマーは配列決定されるべきDNAの鎖のDNAの統合のためのastartingポイントであるように設計されています。, 四個々のＤＮＡ合成反応が行われる。 四つの反応には、通常のA、G、C、およびTデオキシヌクレオチド三リン酸塩（dntp）が含まれ、それぞれがddATP、ddGTP、ddCTP、またはddTTPのいずれかの低レベルのジデオキシヌクレオチド三リン酸塩（ddNTPs）を含む。 四つの反応は、四つのddNTPsのうちどれが含まれていたかに応じて、A、G、CおよびTと命名することができます。 DdNTPがヌクレオチド鎖に取り込まれると、合成は終了する。 これは、ddNTP分子が鎖の次のヌクレオチドとリンクを形成するために必要な3’ヒドロキシル基を欠いているためである。, DdNTPsはランダムに結合されるため、合成はそれぞれの反応に対して多くの異なる位置で終了する。

合成後、A、G、C、およびT反応の生成物は、個々に単一のゲルの四つのレーンにロードされ、ゲル電気泳動法、そのサイズによってDNA断片を分離する方法を用い ゲルのバンドが検出され、その後、配列は、すべての四つのレーンのバンドを含む、ゲルの底から上に読み取られます。, 例えば、四つのレーンすべてにわたる最も低いバンドがa反応レーンに現れる場合、配列中の最初のヌクレオチドはAであり、下から上への次のバンドがTレーンに現れる場合、配列中の第二のヌクレオチドはTであるなどである。反応にジデオキシヌクレオチドを使用するため、サンガー配列決定は”ジデオキシ”配列決定とも呼ばれる。