많은 생물학적 응용 등 미생물학,세포 배양,혈액 그리고 많은 다른 사람을 사용하여 세포를 필요로 하는 우리가 결정하는 세포의 농도를 위해 우리의 실험이다.

셀 계산은 오히려 간단하고 필요한 계산실이라고 hemocytometer,장치에 의해 발명되는 19 세기 프랑스어 해부학자 루이스-찰스 Malassez 을 수행할 수혈구는 계산합니다. 혈구계는 중간에 에칭 된 수직선의 격자가있는 두꺼운 유리 현미경 슬라이드로 구성됩니다., 그리드에는 선으로 덮인 영역이 알려 지도록 지정된 치수가 있으며,이는 특정 용액의 셀 수를 세는 것을 가능하게합니다.

그림 1. 클래식 Hemocytometer

가장 일반적인 유형의 hemocytometer 은”H”모양에 새겨진 중 둘러싸는 두 가지 별도의 거울과 같은 닦은 격자 표면을 제공합 덮개를 미끄러 설치 지역이다(그림 1).,

혈구계 로딩

시작하기 전에 렌즈 종이로 먼지 입자를 제거하여 혈구계와 커버 슬립이 모두 깨끗한 지 확인하십시오. Coverslips 에 사용되는 것에 장착 hemocytometers 특별히 만들어 보다 두꺼운 전통적인 현미경 coverslips 할 수 있어야 하기 때문에 극복하는 표면 장력의 하락의 액체이다.

셀 서스펜션을 적재하기 전에 먼저 coverslip 을 계수 표면 위에 놓아야합니다., 그런 다음 샘플과 함께 피펫 팁을 그림 2 와 같이 V 자형 우물 중 하나에 넣고 샘플을 부드럽게 배출하십시오. 커버 슬립 아래의 영역은 모세관 작용으로 채워집니다. 충분한 액체로 도입되어야 한 그는 미러링하면 그냥 덮여,일반적으로 약 10μl,하지만 너무 많이하지 않습니다. 하나의 혈구계에 두 개의 샘플을 각각 두 개의 그리드에 하나씩로드 할 수 있습니다.

그림 2., Hemocytometer

적재한 hemocytometer 는 현미경 단계에 그 때 두고 세는 격자는 낮은 힘에 초점으로 주어집니다. 샘플이 몇 분 동안 정착되도록 허용하고 공기 방울을 도입하고 계산을 어렵게 만들 수 있으므로 커버 슬립을 움직이지 않도록하십시오.

혈구계에서 세포를 세는 것

혈구계의 전체 격자는 각각 1mm2 인 9 개의 사각형을 포함합니다(그림 3). 혈구계의 중앙 계수 영역(그림 3B)은 25 개의 큰 사각형을 포함하고 각 큰 사각형에는 16 개의 작은 사각형이 있습니다., 셀 때 큰 사각형의 두 변의 선에 해당 셀만 계산하여 셀을 두 번 계산하지 않도록하십시오(그림 3G). 현탁액은 세포 또는 다른 입자가 그리드에서 서로 겹치지 않도록 충분히 희석되어야하며 균일하게 분포되어야합니다.

그림 3. 혈구계에 세포를 계산.

죽은 세포와 생존 가능한 세포를 구별하기 위해 샘플은 종종 Trypan blue 와 같은 특정 얼룩으로 희석됩니다., 이 염색 방법으로도 알려진 염료 배제 염색,사용하는 디아조 화합물 염색하는 선택적으로 침투하여 세포막의 죽은 세포,색칠 그들을 파는 반면,그것에 의해 흡수되지 않 세포막의 라이브세포,따라서 제외한 라이브세포에서 염색한다. 현미경으로 볼 때 죽은 세포는 것으로 나타나 어두운 푸른(그림 4)

림 4. 혈구계에 살아있는 세포의 트리판 블루 배제. (화살표는 죽은 세포의 막을 가로 지르는 염료의 흡수를 나타냅니다.,)

을 수행할 수 계산,결정의 확대하는 데 필요한 인식을 원하는 휴식하고 체계적으로 수은 세포에서 선택한 사각형을 그래서 총 수은 약 100 셀,최소 개수에 필요한 세포의 통계적으로 중요한 계산합니다.

큰 셀의 경우 4 개의 큰 모서리 사각형(그림 3C-F)과 중간 사각형(그림 3B)내부의 셀을 간단히 셀 수 있습니다. 에 대한 고밀도 서스펜션의 작은 세포할 수은 세포에서는 네 개의 외부 및 중앙 사각형의 중앙 광장(그림 3B)또는 더 희석 서스펜션이다.,

기억하는 경우 셀 겹치는 판결,계산으로””에서 겹치는 경우 상단 또는 오른쪽을 지배,그리고””겹치는 경우 아래쪽 또는 왼쪽으로 판정(그림 3G).

지역의(그림 3B)및 각 모서리 스퀘어(그림 3C-F)1mm x1mm=1mm2:의 깊이 각각 0.1mm. 최종 각각의 볼륨 스퀘어에는 깊이가 100nl.,

면 당신이 얻은 총 세포수,셀 농도 계산할 수 있습니다 수식은 다음과 같습니다.

이 경우 예를 들어,당신은 희석의 샘플을 1:1 로 Trypan blue,그리고 당신이 계산됩 325 세포에서 4 코너 사각형 플러스 중앙에 큰 광장, 총당 셀 ml=

을 알고 싶다면 얼마나 많은 세포에 있는 원래의 샘플을 곱 셀 농도에 의해 총 샘플 볼륨에 있습니다. 예를 들어 원래 샘플 볼륨이 5ml 인 경우 샘플에 총=