키워드

Papanicolaou 얼룩,트리코모나스 vaginalis,microscopy.

소개

트리코모나스 vaginalis 은 flagellated 원생동물 원인 Trichomonaisis 과이며 가장 일반적인 치료할 수 있는 성병 세계적입니다. 인간 파필로마 바이러스 외에도 트리코모나스 증은 오늘날 미국에서 가장 흔한 성병 감염입니다. 여성과 남성 모두 t 의 협회., 인간과 함께 vaginalis 면역 결핍 획득 및 전염은 여러 연구에서 나타났습니다. Inwomen,트리코모나스 역할을 재생할 수 있습니다 개발에서의 자궁경부 종양,수술 후 감염 및 불리는 임신 결과 및 요인으로서 불규칙한 골반 및 염증성질병은 불모입니다. 남성에서 트리코모나스 증은 비 고노 코칼뇨염의 원인으로 남성 요인 불임에 기여하는 것으로 나타났습니다. 가장 일반적인 방법진단은 75-95%의 민감도 범위를 갖는 밤새 배양을 통한 것입니다., Rapid 항원 테스트 및 전사 매개 증폭과 같은 방법도 사용되어 왔으며 더 큰 감도를 가지지 만 널리 사용되지는 않습니다. T.vaginalis 의 존재는또한 GENBANK/L23861 에 특정한 프라이머를 사용하여 PCR 로 진단 할 수 있습니다. Pap 얼룩 isa 일상적인 심사 테스트를 사용한의 탐지를 위한 자궁경부 이상 및 precancerousdysplastic 변화의 자궁 경부. 또한 특정 바이러스,박테리아 및 곰팡이를 감지합니다.자궁 경부 및 질의 감염., 거기에는 또한 역학 및 실험 evidencethat Pap 얼룩은 도움이에서 감염을 검출하는 것은 위험 요소와 관련된 cervicalcancer 같은 인유두종 바이러스입니다. 이 연구의 목적은 자궁 경부 및 질 표본에서 Trichomonas vaginalis 의 검출에서 자궁 경부 세포진 검사의 적합성을 결정하는 것이 었습니다.,

재료 및 방법

삼백 자궁 경관과 질 표본에서 목화 팁 어플리케이터는 sentfor 현미경을 동시에 검사하여 기존의 Papanicolaou 방법,문화,의 PCR 의 존재에 대한 트리코모나스 vaginalis 에서 어떤 병원에서 남 andWestern 나이지리아.

Papanicolaou 방법

각각의 표본이었다 지저분에 깨끗한 기름 무료 슬라이드 과정에서 에테르 알코올에 대한 30minutes., 의 표본이었음에도 스테인드에 의해 Papanicolaou 방법은 다음과 같이 해리스 ‘shaematoxylin 지 않고 아세트산,5 분 동안 씻어에서 꼭 물고 차별화된 1%acidalcoholfor30 초고의 블루 스 물에 대한 2 분 거리에 있습니다. 얼룩은 95%알콜에 가지고 가고 2 분 동안 OG6 에서 얼룩이지고,95%알콜에서 헹구고 2MINUTES 를 위한 EA35 에서 얼룩이졌다. 그런 다음 번짐은 절대 알코올,크실렌 및 탑재 된 inDPX 의 두 가지 변화로 취해졌습니다., 염색 된 번짐은 trichomonas vaginalis 및 perinuclear halo 의 존재에 대해 낮은 및 높은 powerobjectives 에서 가벼운 현미경으로 검사되었습니다.

사의 젖은 준비

각 면 울 밀 도포 이후에 씻을 테스트 튜브 포함하는 약 2mlnormal 염. 의 콘텐츠에 붓고 깨끗한 유리 슬라이드 및 조사에서 lightmicroscope 의 존재에 대한 빠르게 움직이는 유기체.

T.vaginalis 의 배양

배양 배지의 제조 및 배양

Kupferberg Trichomonas 배지를 용해시켜 제조 하였다 23.,5g 의 KupferbergTrichomonas 료(QUELAB,캐나다)에서 950ml 의 증류 물의 도움으로 가열,살균한 오토클레이브에서 15 분에서 15Ib 압력(121℃)및 냉각했습니다. 50ml 의 heatinactivated(55-60°C)소 혈청을 첨가 하였다. 항생제(페니실린 G 및 스트렙토 마이신)및항 곰팡이(암포 테리 신 B)를 혼합물에 첨가하고 4ºC 에서 저장 하였다. 약 15ml 의 테메듐을 배양 튜브에 넣고 15 분 동안 37℃로 가열하였다. 자궁 경부 및 질 면봉배지에 넣고 현미경으로 검사 한 후 7 일 동안 37ºC 에서 배양 하였다., 배지를 멸균 인산염 완충 식염수(PBS)pH7.2 에서 2 회 세척하고 DNA 추출을 하였다.

DNA 추출,프라이머 및 PCR

배양액을 ph7.2 에서 멸균 인산염 완충 식염수로 2 회 세척하고 in400μl T/E 완충액을 현탁시켰다. DNA 추출은 SDS 를 사용하여 수행되었고 proteinase K 는 byCTAB/NaCl 을 따랐다. DNA 의 존재는 PCRamplification 이전에 전기 영동에 의해 확인되었다. T 에 기초한 프라이머., vaginalis DNA 는 automatedthermal cycler(Eppendorf master cycler gradient)를 사용하여 pcr 반응을 수행하는 동안 genome(Tib MOLBIOL,Germany)의 300bp 조각을 증폭하는 데 사용되었습니다.

결과

테이블 1Pap 얼룩,젖은 준비 및 PCR

300 개의 표본에 의해 검사 Pap 기술,24(8%) 했 perinuclear halo suggestiveof T.vaginalis 는 동물에서 볼 수 있었 15(5%)니다. 표본의 30(10%)은 T.vaginalis 와 perinuclear halo 를 모두 가린다., 가벼운 현미경 하에서 습식 제제에서,표본의 36(12%)은 T.vaginalis 를 가졌다.

Table2%민감도 비교에서 문화와 PCR

때와 비교해 긍정적인 결과의 문화와 PCR,젖은 준비가 있었 highestsensitivity 의 81.58%뒤에 65.77%의에 기초하여 진단 perinuclear halo 및 T.vaginalis. Perinuclear halo 단독에 기초한 추정 진단은 52.63%였고 Pap smear 에서 유기체의 식별을 기반으로 한 진단은 42 였다.,11%

토론

Papanicolaou 최고의 염색 방법에는 세포학기 때문에 그것을 효과적으로 differentiatemalignant 세포에서 비 악성 세포입니다. 또한 세포질과 그 내용물을 얼룩지게합니다. Itsability 을 차별화하 acidophilic 재료에서 호 염기성 소재뿐만 아니라 그것의 기능 tostain non-cellular 물질과 같은 섬유,크리스탈과 안료,그것은 필수적인 얼룩에는 세포학. T.vaginalis,trichomoniasis 의 원인 생물은 전 세계적으로 가장 흔합니다., 그것은 남성과 여성 모두에 기생합니다.때로는 감염의 초기 단계에서 무증상입니다. T.vaginalis 감염 issaid 하는 역할을 개발의 자궁경부 종양,수술 후 감염 및 adversepregnancy 결과 및 요인으로서 불규칙한 골반 염증 질환과 불모입니다.Pap smears 가 humanpapilloma virus 와 같은 자궁 경부암과 관련된 위험 인자 인 유익한 indetecting 감염이라는 역학적 및 실험적 증거도 있습니다. 트리코모나스 증의 진단 방법에는 여러 가지가 있습니다., 가 easiestmethod 포함하는 시험의 젖은 준비 현미경으로는 theorganisms 볼 수 있에 신속하게 이동이 모든 방향. 다른 방법으로는 하룻밤 배양,신속한 항원 검사 및 전사 매개 증폭 및 PCR 이 있습니다.자궁 경부 세포진 검사는 자궁 경부 이상 및 자궁 경부의 암성 이형성 변화의 검출에 사용되는 일상적인 선별 검사입니다. 또한 자궁 경부 및 질의 특정 바이러스,박테리아 및 곰팡이 감염을 감지합니다., 이 실험에서,습식 제제정기 및 질 도말 및 Papanicolaou 염색 도말을 검사하고 7 일 배양 후 PCR 에서 얻은 결과를 비교 하였다. 상피에서 주핵 후광의 존재세포는 T.vaginalis 에 대한 추정 진단으로 사용되었습니다. Pap 번짐은 표 1 및 2 에 도시 된 바와 같이 T.vaginalis 의 검출에서 wetpreparations 보다 우수하지 않다. 문화는 t.vaginalis 를 검출하는 매우 민감한 방법이지만 비용이 많이 들고 시간이 많이 걸립니다. 그것은 결론 지었다.t 동안., vaginalis 는 자궁 경부 및 질 Pap smears 에서보고되어야하며,thesesmears 에서의 부재는 환자의 유기체의 절대 부재에 대한 표시가 아닙니다.