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DNA 시퀀싱

DNA 시퀀싱은 DNAmolecule 의 서열을 결정하는 데 사용되는 실험실 방법입니다. 이 방법은 1975 년 프레드릭 생거(Frederick Sanger)에 의해 개발되었는데,1980 년 DNA 서열에 대한 공헌으로 노벨 화학상을 수상했습니다. 결과적으로,종종 생거 시퀀싱(Sanger Sequencing)으로 불린다.

Sanger 시퀀싱에서 시퀀싱 될 DNA 는 DNA 합성을위한 템플릿으로 보존됩니다. DNA 프라이머는 dna 의 가닥에 DNA 합성에 대 한 astarting 포인트 서열 될 수 있도록 설계 되었습니다., 4 개의 개별 DNA 합성 반응이 수행됩니다. 네 반응 includenormal A,G,C,T deoxynucleotide triphosphates(dNTPs),그리고 각 포함 낮은 수준의 네 가지 중 하나 dideoxynucleotide triphosphates(ddNTPs):ddATP,ddGTP,ddCTP,또는 ddTTP. 네 가지 반응은 네 가지 ddNTPs 중 어느 것이 포함되었는지에 따라 A,G,C 및 T 로 명명 될 수 있습니다. DdNTP 가 뉴클레오타이드의 사슬로 결합되면 합성이 종결된다. 이것은 ddNTP 분자가 사슬의 다음 뉴클레오타이드와 연결 고리를 형성하는 데 필요한 3’수산기가 부족하기 때문입니다., DdNTPs 가 무작위이기 때문에반응에 대해 많은 다른 위치에서 합성이 종료됩니다.

다음과 같은 합성,제품의 A,G,C,T 반응 areindividually 드로의 차선의 단일 젤로 구분 사용하여 gelelectrophoresis,는 방법 DNA 분리 조각해서 그들의 크기입니다. Thebands 의 젤는 검출한 다음 시퀀스에서 읽은 바닥의 겔을,상단 등을 포함하는 모든 네 있습니다., 예를 들면,thelowest 밴드에 걸쳐 있는 모든 네 차선에서 나타나는 반응 lane,다음 의 첫 번째 염기에서 시퀀 A. 그런 다음 경우 다음 밴드 바닥에서 topappears T lane,두 번째 염기에서 시퀀 T 니다.반응에서 디데 옥시 뉴클레오티드의 사용으로 인해,생거 시퀀싱은또한”디데 옥시”시퀀싱이라고합니다.