DNA-sekvensering är en laboratoriemetod som används för att bestämma sekvensen av en DNAmolecule. Metoden utvecklades av Frederick Sanger 1975, som senare tilldelades Nobelpriset i kemi 1980 för sina bidrag tillförståelse av DNA-sekvenser. Följaktligen kallas det ofta Sanger-sekvensering.

i Sanger-sekvensering, DNA som ska sekvenserasserverar som en mall för DNA-syntes. En DNA-primer är utformad för att vara astarting punkt för DNA-syntes på strängen av DNA som ska sekvenseras., Fyraindividuella DNA-syntesreaktioner utförs. De fyra reaktioner includenormal A, G, C och T deoxynucleotide trifosfater (dntp), och varje containsa låg nivå i en av de fyra dideoxynucleotide trifosfater (ddNTPs): ddATP,ddGTP, ddCTP, eller ddTTP. De fyra reaktionerna kan namnges A, G,C och T, enligt vilken av de fyra ddNTPs inkluderades. När en ddNTP ärinkorporerad i en kedja av nukleotider, slutar syntesen. Detta beror på att ddNTP-molekylen saknar en 3′ hydroxylgrupp, som krävs för att bilda en länk med nästa nukleotid i kedjan., Eftersom ddNTPs är slumpvisinkorporerade, slutar syntesen vid många olika positioner för varjereaktion.

efter syntes är produkterna från A -, G -, C-och t-reaktionerna individuellt laddade i fyra körfält av en enda gel och separerade med användning av gelelektrofores, en metod som separerar DNA-fragment av deras storlekar. Gelens band detekteras, och sedan läses sekvensen från botten avgelén till toppen, inklusive band i alla fyra körfält., Till exempel, om detstörsta bandet över alla fyra körfält visas i A-reaktionsfilen, är den första nukleotiden i sekvensen A. Om nästa band från botten till toppvisas i T-banan, är den andra nukleotiden i sekvensen T och så vidare.På grund av användningen av dideoxinukleotider i reaktionerna är Sanger-sekvenseringäven kallad ”dideoxi” – sekvensering.