nyckelord

Papanicolaou smutsfläckar, Trichomonas vaginalis, mikroskopi

introduktion

Trichomonas vaginalis är en flagellerad protozo som orsakar Trichomonaisis och är den mestvanligt härdbar sexuellt överförbar sjukdom över hela världen . Förutom humanpapillomavirus är trichomoniasis den vanligaste sexuellt överförbara infektionen i Enhetenstater idag. Bland både kvinnor och män, föreningen för T., vaginalis med humanimmunodeficiency förvärv och överföring har visats i flera studier . Kvinnor kan trichomoniasis spela en roll i utvecklingen av cervikal neoplasi, postoperativa infektioner och negativa graviditetsutfall och som en faktor vid atypisk inflammatorisksjukdom och infertilitet. Hos män har trichomoniasis uppstått som en orsak till nongonokokaluretrit och som bidrar till manlig infertilitet . Den vanligaste metoden fördiagnos är via övernattningskultur med ett känslighetsområde på 75-95%., Metoder, somrapid antigentest och transkriptionsmedierad förstärkning, har också använts och är saidför att ha större känslighet, men är inte i utbredd användning . Förekomsten av T. vaginalis canalso diagnostiseras av PCR med primers specifika för GENBANK/L23861 . Pap-smeten ärett rutinmässigt screeningtest som används för detektering av livmoderhalsavvikelser och precancerousdysplastiska förändringar i livmoderhalsen . Det upptäcker också vissa virus -, bakterie-och svampinfektioner i livmoderhalsen och vagina ., Det finns också epidemiologiska och experimentella bevisatt Pap-smuts är fördelaktiga för att upptäcka infektioner som är riskfaktorer associerade med cervicalcancer, såsom humant papillomvirus . Syftet med denna studie var att bestämma lämplighetenav Pap-smet vid detektering av Trichomonas vaginalis i livmoderhals-och vaginala exemplar.,

material och metoder

trehundra livmoderhals-och vaginala exemplar i bomullsull tippade applikatorer som skickades för mikroskopi undersöktes samtidigt med den konventionella Papanicolaou-metoden, kulturen och genom PCR för närvaron av Trichomonas vaginalis på vissa sjukhus i södra och västra Nigeria.

Papanicolaou metod

varje prov smordes på en ren fettfri bild och fixerades i eteralkohol för 30minuter., Proverna färgades sedan av Papanicolaou-metoden enligt följande: Harris ’ shaematoxylin utan ättiksyra i 5 minuter, sköljdes i kranvatten och differentierades i 1% acidalkohol i 30 sekunder och blädes i Scotts vatten i 2 minuter. Smuts togs till 95% alkohol och färgades i OG6 i 2 minuter, sköljdes i 95% alkohol och färgades i EA 35 för 2minuter. Smuts togs sedan till två förändringar av absolut alkohol, xylen och monterad inDPX., De färgade smutsarna undersöktes under ljusmikroskopet vid låga och höga kraftobjektiv för närvaron av Trichomonas vaginalis och perinukleär halo.

undersökning av våt beredning

varje bomullstuss tippad applikator sköljdes därefter i ett provrör innehållande ca 2 mlnormal saltlösning. Innehållet hälldes på en ren Glasskiva och undersöktes under ljusmikroskopet för närvaron av en snabbt rörliga organismer.

kultur av T. vaginalis

beredning av odlingsmedium och kultur

Kupferberg Trichomonas medium bereddes genom upplösning av 23.,5g av KupferbergTrichomonas bas (QUELAB, Kanada) i 950 ml destillerat vatten med hjälp av värme,steriliseras i en autoklav för 15 min vid 15 Ib tryck (121°C) och kyls. 50 ml heatinaktiverat (55-60°C) bovint serum tillsattes. Antibiotika (penicillin G och streptomycin) ochantifungal (amfotericin B) tillsattes till blandningen och lagrades vid 4ºC. Cirka 15 ml avmedium sattes i ett kulturrör och upphettades till 37°C i 15 min. De cervicala och vaginala swaberna placerades i mediet och inkuberades vid 37ºC i 7 dagar varefter de undersöktes mikroskopiskt., Mediet tvättades två gånger i steril fosfatbuffrad saltlösning (PBS) pH7.2 och utsattes för DNA-extraktion.

DNA-extraktion, primrar och PCR

odlingarna tvättades två gånger i steril fosfatbuffrad saltlösning vid pH7. 2 och suspenderades in400µl t / e-buffert. DNA-extraktion utfördes med hjälp av SÄKERHETSDATABLADET och proteinas K följt byCTAB/NaCl. Närvaron av DNA bekräftades genom elektrofores före Pcramplifiering. Primers baserade på T., vaginalis DNA som används för att förstärka en 300 bp bit ofgenome (TIB MOLBIOL, Tyskland) medan PCR-reaktionen utfördes med hjälp av automatedthermal cykler (Eppendorf master apparat gradient).

resultat

tabell 1 cellprov, våtberedning och PCR

av de 300 prover som undersöktes med Pap-tekniken hade 24 (8%) perinukleär halo suggestiv av T. vaginalis medan organismerna sågs i 15 (5%) av dem. 30 (10%) av specimenshad både T. vaginalis och perinuclear halo., I våta preparat under ljusmikroskopet hade 36(12%) av proverna T. vaginalis.

tabell 2 procentuell känslighet i jämförelse med kultur och PCR

jämfört med positiva resultat av kultur och PCR hade våtberedningar den högsta känsligheten på 81,58% följt av 65,77% av diagnosen baserad på perinukleär halo och T. vaginalis. Presumptiv diagnos baserad på perinukleär halo ensam var 52.63% medan diagnosbaserad på identifiering av organismer i Pap-Smet var 42.,11%

diskussion

Papanicolaou är den bästa färgningsmetoden i cytologi, eftersom det bidrar till att effektivt differentieramaligna celler från icke-maligna celler. Det fläckar också cytoplasman och dess innehåll . Itsability att differentiera acidofila material från basofila material samt dess förmåga atthålla icke-cellulära ämnen som fibrin, kristaller och pigment, gör det till en väsentlig fläck i cytologi . T. vaginalis, den orsakande organismen för trichomoniasis är den mest obotliga sexuellt överförbara organismen över hela världen ., Det parasiterar både män och kvinnordär det ibland är asymptomatiskt i de tidiga stadierna av infektionen. T. vaginalis infektion ärsag att spela en roll i utvecklingen av cervikal neoplasi, postoperativa infektioner och motgånggraviditetsresultat och som en faktor i atypisk bäckeninflammatorisk sjukdom och infertilitet .Det finns också epidemiologiska och experimentella bevis på att Pap-smuts är fördelaktiga idetekterande infektioner som är riskfaktorer associerade med livmoderhalscancer, såsom humanpapillomvirus . Det finns flera metoder för diagnos av trichomoniasis., Det finns den enklastemetod som innebär undersökning av en våt beredning under mikroskop därorganismer ses rör sig snabbt i alla riktningar. Andra metoder inkluderar övernattningskultur, snabb antigentest och transkriptionsmedierad förstärkning och med PCR .Pap smear är ett rutinmässigt screeningtest som används för detektering av livmoderhalsavvikelser ochprecancerösa dysplastiska förändringar i livmoderhalsen . Det upptäcker också vissa virus -, bakterie-och svampinfektioner i livmoderhalsen och vagina ., I detta experiment undersöktes våta preparat avcervikala och vaginala smuts och Papanicolaou färgade smuts och jämfördes medResultat erhållna från PCR efter 7 dagars kultur. Närvaron av perinukleär halo i epitelnceller användes som en presumptiv diagnos för T. vaginalis. Pap-smuts är inte överlägsen våtpreparationer vid detektering av T. vaginalis som visas i tabellerna 1 och 2. Kultur är en mycketkänslig metod för att upptäcka T. vaginalis men det är dyrt och tidskrävande. Det är slutsatsen att medan T., vaginalis bör rapporteras i livmoderhals-och vaginala Pap-utstryk, dess frånvaro i dessasfläckar är inte en indikation på absolut frånvaro av organismen hos patienten.