Mange biologiske programmer, for eksempel mikrobiologi, cellekultur, blod arbeid og mange andre som bruker celler krever at vi bestemme konsentrasjonene for vår eksperiment.

Cell telling er ganske enkel og krever en telling kammer som kalles en hemocytometer, en enhet som er oppfunnet av det 19. århundre fransk anatomi Louis-Charles Malassez å utføre blod celle teller. En hemocytometer består av et tykt glass mikroskop lysbilde med et rutenett av linjer vinkelrett etset i midten., Rutenettet har angitt dimensjoner slik at området som omfattes av linjene er kjent, noe som gjør det mulig å telle antall celler i et bestemt volum av løsning.

Figur 1. En Klassisk Hemocytometer

Den mest vanlige typen av hemocytometer har en «H» – form gravert i midt-som omslutter to separate speil-lignende polert rutenett overflater og gir dekkglass montering området (Figur 1).,

Legge hemocytometer

Før du starter sørge for at både hemocytometer og dens dekkglass er rene ved å fjerne støvpartikler med linsepapir. Coverslips som brukes for montering på hemocytometers er spesielt laget for å være tykkere enn vanlig mikroskopi coverslips fordi de må være i stand til å overvinne overflatespenning av en dråpe av væske.

sørg for å første omgang dekkglasset over telle overflaten før du legger i cellesuspensjon., Så sett pipettespissen med prøve i en av de V-formede brønner, som i Figur 2, og forsiktig utvise eksempel. Området under dekkglasset fyller med kapillarkrefter. Nok væske bør innføres slik at speilet overflaten er bare dekket, vanligvis rundt 10 µl, men ikke legg for mye i overflaten. Du kan legge to prøver på en hemocytometer, ett i hver av de to nettene.

Figur 2., Legge Hemocytometer

Det er lagt hemocytometer er deretter plassert på mikroskopet scenen og telle rutenett er satt i fokus på lavt strømforbruk. La prøven til å bosette seg i et par minutter, og unngå å flytte dekkglasset som det kan introdusere luftbobler og gjøre telle vanskelig.

Telle celler i en hemocytometer

full grid på en hemocytometer inneholder ni rutene, som hver er 1 mm2 (Figur 3). Den sentrale telle området av hemocytometer (Figur 3B) inneholder 25 store kvadrater og alle de store plassen har 16 mindre firkanter., Når telle, teller bare de cellene på de linjene som to sider av den store plassen for å unngå å telle celler to ganger (Figur 3G). Suspensjoner bør være tynn nok, slik at cellene eller andre partikler ikke overlapper hverandre på nettet, og bør være jevnt fordelt.

Figur 3. Telle Celler på Hemocytometer.

for Å skille mellom døde og levende celler, prøven er ofte fortynnes med en bestemt flekk, som Trypan blå., Dette farging metode, også kjent som fargestoff utelukkelse farging, bruker en diazo fargestoff som selektivt penetrerer cellemembraner av døde celler, coloring dem blå, mens det ikke er absorbert av membraner av levende celler, og dermed unntatt levende celler fra flekker. Sett under et mikroskop, døde celler vil vises som mørk blå (Figur 4)

Figur 4. Trypan Blå Utelukkelse av Levende Celler på Hemocytometer. (Pil angir opptak av fargestoff over hinnen av døde celler.,)

for Å utføre tellingen, bestemme forstørrelse nødvendig å anerkjenne ønsket celle type og systematisk telle celler i utvalgte rutene, slik at det totale antallet er omtrent 100 celler, et minimum antall celler som er nødvendig for en statistisk signifikant teller.

For store celler, kan du bare telle celler inne i de fire store hjørne rutene (Figur 3C-F) og den midterste (Figur 3B). For en tett suspensjon av små celler du kan ønske å telle celler i de fire ytre og midtre kvadratene av den sentrale plassen (Figur 3B), eller lage en mer fortynnet suspensjon.,

Husk at hvis en celle overlapper en avgjørelse, regner det som «i» hvis det overlapper toppen eller rett avgjørelse, og «ut» hvis det overlapper bunn eller venstre dommen (Figur 3G).

området i midten (Figur 3B), og hvert hjørne av firkanten (Figur 3C-F) er 1 mm x 1 mm = 1 mm2: dybden av hver rute er 0,1 mm. Det endelige volumet av hver rute på at dybden er 100nl.,

Når du har fått den totale blodceller, celle konsentrasjon kan beregnes fra følgende formel:

Så, for eksempel, hvis du fortynnet prøve 1:1 med Trypan blå, og du teller 325 celler i 4 hjørnet torg plus central store plassen, totalt celler per ml =

Hvis du ønsker å vite hvor mange celler som du har i din opprinnelige prøven, bare multiplisere konsentrasjonene av total prøvevolum. For eksempel, hvis din opprinnelige prøvevolum er 5 ml, deretter prøven har en total =