DNA-sekvensering er et laboratorium metoden ble brukt til å bestemme rekkefølgen av en DNAmolecule. Metoden ble utviklet av Frederick Sanger i 1975, som var laterawarded nobelprisen i kjemi i 1980 for hans bidrag tounderstanding DNA-sekvenser. Derfor er det ofte referert til som Sanger-Sekvensering.

I Sanger-sekvensering, DNA for å være sequencedserves som en mal for DNA-syntese. En DNA-primer er designet for å være astarting punkt for DNA-syntese på strand av DNA for å bli sekvensert., Fourindividual DNA-syntese reaksjoner er utført. De fire reaksjoner includenormal A, G, C og T deoxynucleotide triphosphates (dntp), og hver containsa lavt nivå av én av fire dideoxynucleotide triphosphates (ddNTPs): ddATP,ddGTP, ddCTP, eller ddTTP. De fire reaksjoner kan bli kalt A, G, C og T,i henhold til hvilken av de fire ddNTPs var inkludert. Når en ddNTP isincorporated inn i en kjede av nukleotider, syntese opphører. Dette er becausethe ddNTP-molekylet mangler et 3′ – hydroksyl gruppe, som er nødvendig for å danne en linkwith neste nukleotid i kjeden., Siden ddNTPs er randomlyincorporated, syntese og avsluttes på mange forskjellige posisjoner for eachreaction.

Følgende syntese, produkter av A, G, C og T reaksjoner areindividually lagt til fire kjørefelt på en enkel gel og separert ved hjelp av gelelectrophoresis, en metode som skiller DNA-fragmenter av deres størrelser. Thebands av gel er oppdaget, og deretter sekvens som er lest fra bunnen ofthe gel til toppen, inkludert band i alle fire kjørefelt., For eksempel, hvis thelowest band på tvers av alle fire kjørefelt, vises i En reaksjon lane, så thefirst nukleotid i den rekkefølgen som er A. Så hvis den neste band fra bunn til topappears i T lane, den andre nukleotid i den rekkefølgen som er T, og så videre.På grunn av bruken av dideoxynucleotides i reaksjoner, Sanger-sekvensering isalso kalt «dideoxy» sekvensering.