Nøkkelord

Papanicolaou utstryk, Trichomonas vaginalis, mikroskopi

Innledning

Trichomonas vaginalis er en flagellated protozo som fører til Trichomonaisis og er mostcommon kureres seksuelt overførbar sykdom over hele verden . Bortsett fra humanpapillomavirus, trichomoniasis er den vanligste seksuelt overførbare infeksjonen i UnitedStates i dag. Både blant kvinner og menn, foreningen av T., vaginalis med humanimmunodeficiency kjøp og overføring har vært vist i flere studier . Inwomen, trichomoniasis kan spille en rolle i utviklingen av livmorhalskreft neoplasi, postoperative infeksjoner og uønskede svangerskap utfall og som en faktor i atypical bekken inflammatorydisease og infertilitet. I menn, trichomoniasis har dukket opp som en årsak til nongonoccocalurethritis og som bidrar til mannlig faktor i infertilitet . Den vanligste metoden ofdiagnosis er via natten kultur med en følsomhet utvalg av 75-95% ., Metoder, slik asrapid antigen testing og transkripsjonsformidlet amplifikasjon, har også blitt brukt og er saidto har større følsomhet, men er ikke i utstrakt bruk . Tilstedeværelsen av T. vaginalis canalso diagnostiseres ved PCR, ved å bruke primere spesifikke for GENBANK/L23861 . Den Pap smøre isa rutinemessig screening test som brukes for påvisning av livmorhalskreft misdannelser og precancerousdysplastic endringer av livmor cervix . Den oppdager også visse viral, bakteriell, og fungalinfections av livmorhalsen og skjeden ., Det er også epidemiologiske og eksperimentelle evidencethat Pap utstryk er til nytte i å oppdage infeksjoner som er risikofaktorer forbundet med cervicalcancer, slik som humant papilloma virus . Målet med denne studien var å finne ut den suitabilityof celleprøve i påvisning av Trichomonas vaginalis i livmorhalsen og vaginale prøver.,

Materialer og Metoder

Tre hundre livmorhalsen og vaginale prøver i bomull tippet applikatorer som var sentfor mikroskopi ble samtidig vurdert ved den konvensjonelle Papanicolaou-metoden,kultur og av PCR for tilstedeværelse av Trichomonas vaginalis i noen sykehus i Sør-andWestern Nigeria.

Papanicolaou metode

Hver prøve ble smurt på et rent fett gratis skyv og fast i eter-alkohol for 30minutes., Prøvene ble deretter farget av Papanicolaou metode som følger: Harris’shaematoxylin uten eddiksyre i 5 minutter, skylles i vann fra springen og differensiert i 1% acidalcoholfor 30 sekunder og blued i Scotts vann i 2 minutter. Utstryk ble tatt til 95%alkohol og farget i OG6 for 2 minutter, skylt i 95% alkohol og farget i EA-35 for 2minute. Utstryk ble deretter tatt til to endringer i absolutt alkohol, xylen og monteres inDPX., Farget utstryk ble undersøkt under lys mikroskop ved lav og høy powerobjectives for tilstedeværelse av Trichomonas vaginalis og perinuclear halo.

Undersøkelse av våt forberedelse

Hver bomull tippet applikatoren senere ble skylt i et reagensglass som inneholder ca 2 mlnormal saltvann. Innholdet var helles over på et rent glass-slide og undersøkt under lightmicroscope for tilstedeværelsen av et raskt bevegelige organismer.

Kultur av T. vaginalis

Utarbeidelse av kultur medium og kultur

Kupferberg Trichomonas medium var forberedt ved å oppløse 23.,5g av KupferbergTrichomonas base (QUELAB, Canada) i 950 ml destillert vann ved hjelp av varme,sterilisert i en autoklav i 15 min på 15 Ib press (121°C) og avkjølt. 50ml av heatinactivated (55-60°C) bovint serum ble lagt til. Antibiotika (penicillin G og streptomycin) andantifungal (Amfotericin B) ble lagt til blandingen og lagret ved 4 grader c. Om 15ml av themedium ble satt i en kultur rør og varmes opp til 37°C i 15 min. Slimet og vaginal swabswere plassert inn i mediet, og inkubert ved 37ºC for 7 dager etter de ble undersøkt mikroskopisk., Mediet ble vasket to ganger i sterilt fosfatbufret saltløsning (PBS)pH7.2 og utsatt for DNA-ekstraksjon.

DNA-ekstraksjon, primere og PCR –

– >

kulturer ble vasket to ganger i sterilt fosfatbufret saltvann pH7.2 og suspendert in400µl T/E-buffer. DNA-ekstraksjon ble utført ved hjelp av SDS og proteinase K fulgt byCTAB/NaCl. Tilstedeværelse av DNA ble bekreftet ved elektroforese før PCRamplification. Primere basert på T., vaginalis DNA ble brukt til å forsterke en 300 bp stykke ofgenome (TIB MOLBIOL, Tyskland), mens PCR-reaksjonen ble utført ved hjelp av automatedthermal cycler (Eppendorf master gradient cycler).

Resultater

Tabell 1 celleprøve, våt forberedelse og PCR –

– >

Av 300 prøver undersøkt av Pap-teknikk, 24 (8%) hadde perinuclear halo suggestiveof T. vaginalis mens organismer ble sett på 15 (5%) av dem. 30 (10%) av specimenshad både T. vaginalis-og perinuclear halo., I våte forberedelser under lys mikroskop, 36(12%) av prøvene hadde T. vaginalis.

– >

Tabell 2 Prosentpoeng sensitivitet i forhold til kultur og PCR –

– >

Når sammenlignet med positive resultater av kultur og PCR, våt forberedelser hadde highestsensitivity av 81.58% etterfulgt av 65.77% av diagnose basert på perinuclear halo og T. vaginalis. Presumptive diagnose basert på perinuclear halo alene var 52.63%, mens diagnosisbased på identifikasjon av organismer i celleprøve var 42.,11%

Diskusjon

Papanicolaou er den beste farging metode i cytologi, fordi det bidrar til å effektivt differentiatemalignant celler fra ikke-maligne celler. Det er også flekker cytoplasma og dens innhold . Itsability å skille acidophilic materialer fra basophilic materialer, så vel som dens evne til tostain ikke-cellulær stoffer som fibrin, krystaller og pigmenter, gjør det en viktig flekken i cytologi . T. vaginalis, den utløsende organismen for trichomoniasis er den mest commoncurable seksuelt overførbare organismen over hele verden ., Det parasitizes både menn og femaleswhere det er noen ganger asymptomatiske i de tidlige stadier av infeksjonen. T. vaginalis-infeksjon issaid å spille en rolle i utviklingen av livmorhalskreft neoplasi, postoperative infeksjoner, og adversepregnancy utfall og som en faktor i atypical inflammatorisk sykdom i bekkenet og infertilitet .Det er også epidemiologiske og eksperimentelle bevis for at Pap-utstryk er gunstig indetecting infeksjoner som er risikofaktorer assosiert med livmorhalskreft, slik som humanpapilloma virus . Flere metoder for diagnostisering av trichomoniasis eksisterer., Det er easiestmethod som innebærer undersøkelse av en våt preparatet i mikroskop der theorganisms er sett beveger seg raskt i alle retninger. Andre metoder inkluderer overnatting kultur, rask antigen-testing, og transkripsjonsformidlet amplifikasjon og ved PCR .Celleprøve er en rutinemessig screening test som brukes for påvisning av livmorhalskreft misdannelser andprecancerous dysplastisk endringer av livmor cervix . Den oppdager også visse viral, bakteriell og fungal infeksjoner av livmorhalsen og skjeden ., I dette eksperimentet, våt forberedelser ofcervical og vaginal utstryk og Papanicolaou farget utstryk ble undersøkt og sammenlignet withresults innhentet fra PCR etter 7 dager kultur. Tilstedeværelsen av perinuclear halo i epithelialcells ble brukt som en presumptive diagnose for T. vaginalis. Pap utstryk er ikke overlegen wetpreparations i påvisning av T. vaginalis som vist i tabell 1 og 2. Kultur er en verysensitive metoden for å oppdage T. vaginalis-men det er dyrt og tidkrevende. Det er concludedthat mens T., vaginalis skal rapporteres i livmorhalsen og vaginal Pap utstryk, sitt fravær i thesesmears er ikke en indikasjon på absolutt fravær av organismen i pasienten.