Articles

Plasma sanguină versus ser: care este potrivit pentru prelevarea microvesiculelor membranei circulante la subiecții umani? | Analele Bolilor Reumatice

  • membrana microvesicles
  • ser
  • plasma
  • de coagulare
  • lupus

Am citit cu mare interes articolul de Kato și colegii cu privire la ‘Apoptoza derivate din membrana veziculelor conduce cGAS–STING cale și de a spori de tip I IFN producție în lupusul eritematos sistemic’.,1 Cu toate acestea, suntem îngrijorați că autorii au studiat exclusiv serul de sânge, adică toate probele de sânge de la pacienții lor cu lupus și controale sănătoase au fost coagulate ex vivo înainte de analiză.cel puțin trei modificări majore pot apărea la populația de microvesicule membranare (MVs) în timpul coagulării într-o eprubetă. În primul rând, un subset de MV-uri circulante participă și devin consumate de coagulare., De exemplu, studiile din grupul nostru și alții au indicat că peste jumătate din totalul membrana MVs în sânge plasma2 sau generate in vitro MVs3 4 display fosfatidilserina (PS) de pe suprafata lor. PS-pozitiv MVs sunt procoagulant în raport cu cei care sunt PS negative2 3 5 pentru PS forme catalitică suprafața membranei care promovează asamblare și cataliză de factor de coagulare complexe.3 6 este valabil mai ales pentru MVs apoptotice,3 5 7 8 deoarece expunerea la suprafața membranei PS este un semn distinctiv al apoptozei celulare.,9 astfel, MVs PS-pozitiv ar putea fi implicat preferențial în formarea cheagurilor în tubul de prelevare atunci când sângele este extras fără anticoagulante. MVs rămase în tubul seric nu pot fi reprezentative pentru populația inițială de MVs care au fost în circulație.4

o a doua modificare în timpul coagulării ex vivo este generarea de noi populații de MV care nu au fost prezentate inițial în circulație. Trombocitele devin activate în timpul formării cheagurilor într-o eprubetă și eliberează MVs generate artificial in vitro în timpul procesului de eșantionare.,10 MVs derivate din trombocite generate în eprubeta de probă pot reprezenta 50% din MVs în ser.10 alte celule din sânge pot elibera, de asemenea, MVs în timpul coagulării ex vivo. Aceste MVs „artificiale” din ser nu pot reprezenta starea fiziopatologică a sângelui circulant la pacienții cu lupus și controale sănătoase.o a treia modificare în timpul coagulării este posibila scindare a proteinelor pe MVS de către proteaze, adică trombină, generată în timpul cascadei de coagulare. Această problemă nu a fost studiată pe scară largă în domeniul cercetării MV, dar este cunoscută și în alte domenii., De exemplu,trombina digeră apolipoproteina-B în fragmente, 11 și lipoproteinele „intacte” sunt izolate din plasmă, nu din ser.

În opinia noastră, sânge plasma12 pregătit în prezența anticoagulantelor – ar trebui să fie utilizate în MV cercetare, deoarece se evită consumul de original circulant’ MVs, și producția de „artificial” MVs, precum și expunerea la proteaze, timpul de coagulare ex vivo în ser proba de tuburi. Dar rezultatele studiului cu ser, așa cum sunt utilizate de Kato et al și alte grupuri, ar trebui confirmate cu plasma sanguină., Artefactele cauzate de coagularea sângelui într-o eprubetă pot afecta în mare măsură rezultatele și concluziile oricăror studii ale MVs cu membrană circulantă în investigațiile translaționale clinice. Prin urmare, prelevarea de probe de sânge a membranei circulante MVs la subiecții umani este un punct important care trebuie clarificat printre investigatorii care efectuează cercetări translaționale clinice.

    1. Kato Y,
    2. Park J,
    3. Takamatsu H, și colab.

    ., Veziculele membranare derivate din apoptoză conduc calea CGAS-STING și sporesc producția de IFN de tip I în lupusul eritematos sistemic. Ann Rheum Dis 2018; 77: 1507–2015.doi:10.1136/annrheumdis-2018-212988

    1. Shet CA,
    2. Aras O,
    3. Gupta K, et al

    . Sângele secera conține microparticule pozitive ale factorului tisular derivate din celulele endoteliale și monocite. Sânge 2003; 102: 2678-83.doi:10.1182/sânge-2003-03-0693

    1. Liu M-L,
    2. Reilly MP,
    3. Casasanto P, et al

    ., Îmbogățirea colesterolului monocitelor / macrofagelor umane induce expunerea la suprafață a fosfatidilserinei și eliberarea microvesiculelor pozitive ale factorului de țesut biologic activ. Arterioscler Trombi Vasc Biol 2007; 27: 430-5.doi:10.1161/01.ATV.0000254674.47693.e8

    1. Latham SL,
    2. Tiberti N,
    3. Gokoolparsadh N, et al

    . Imuno-analiza microparticulelor: sondarea la limitele detectării. Sci Rep 2015; 5.doi:10.,1038/srep16314

    1. Li M,
    2. Yu D,
    3. Williams KJ, et al

    . Fumul de tutun induce generarea de microvesicule procoagulante din monocite/macrofage umane. Arterioscler Trombi Vasc Biol 2010; 30: 1818-24.doi: 10.1161 / ATVBAHA.110.209577

    1. Zwaal RFA,
    2. Comfurius P,
    3. Bevers I

    . Expunerea la suprafață a fosfatidilserinei în celulele patologice. Cell Mol Life Sci 2005; 62: 971-88.doi:10.,1007/s00018-005-4527-3

    1. Casciola-Rosen L,
    2. Rosen-O,
    3. Petri M, et al

    . Blebs de suprafață pe celulele apoptotice sunt site-uri de activitate procoagulantă îmbunătățită: implicații pentru evenimentele de coagulare și răspândirea antigenică în lupusul eritematos sistemic. Proc Natl Acad Sci U S A 1996; 93: 1624-9.doi:10.1073/pnas.93.4.1624

    1. Stampfuss JJ,
    2. Censarek P,
    3. Fii D, et al

    ., Mediul membranar, mai degrabă decât expresia factorului tisular, determină formarea trombinei declanșată de celulele monocitare supuse apoptozei. J Leukoc Biol 2008; 83: 1379-81.doi:10.1189 / jlb.1207843

    1. Balasubramanian K,
    2. Mirnikjoo B,
    3. Schroit AJ

    . Externalizarea reglementată a fosfatidilserinei la suprafața celulei: implicații pentru apoptoză. J Biol Chem 2007; 282: 18357-64.doi:10.1074/jbc.M700202200

    1. Witwer KW,
    2. Buzás EI,
    3. Bemis LT, et al

    ., Standardizarea metodelor de colectare, izolare și analiză a probelor în cercetarea veziculelor extracelulare. J Extracell Veziculele 2013; 2. doi:doi: 10.3402/jev.v2i0.20360

    1. Cardin AD,
    2. Witt KR,
    3. Chao J, et al

    . Degradarea apolipoproteinei B-100 a lipoproteinelor cu densitate scăzută a plasmei umane prin kallikreine tisulare și plasmatice. J Biol Chem 1984; 259: 8522-8.

    1. Liu M,
    2. Xu H,
    3. Bashir M, și colab.

    ., Microvesicule proinflamatorii la pacienții cu lupus eritematos cutanat. J Invest Dermatol 2014; 134.